[發明專利]一種抗CD33單鏈抗體及光敏劑復合物及其制備方法有效
| 申請號： | 201710128478.6 | 申請日： | 2017-03-06 |
| 公開（公告）號： | CN106834300B | 公開（公告）日： | 2019-12-31 |
| 發明（設計）人： | 趙磊;李斯文 | 申請（專利權）人： | 李斯文;趙磊 |
| 主分類號： | C12N15/13 | 分類號： | C12N15/13;C07K16/30;C12N15/63;A61K41/00;A61K47/68;A61K47/04;A61K47/10;A61P35/00 |
| 代理公司： | 11569 北京高沃律師事務所 | 代理人： | 王加貴 |
| 地址： | 210000 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 cd33 抗體 光敏劑 復合物 及其 制備 方法 | ||
1.編碼抗CD33單鏈抗體的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一種抗CD33單鏈抗體，編碼所述抗體的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.一種抗CD33單鏈抗體表達載體，所述抗CD33單鏈抗體表達載體為融合有權利要求1所述基因的pE-SUMO載體。
4.一種光敏劑復合物，其特征在于，所述復合物由權利要求1所述基因編碼的抗CD33單鏈抗體、Ce6和PEG修飾的C60連接而成；經PEG修飾修飾后的C60與Ce6通過非共價鍵相連；連接產物上的Ce6與單鏈抗體通過酰胺鍵相連。
5.根據權利要求4所述的光敏劑復合物，其特征在于，所述PEG的Mw分子量為3000。
6.根據權利要求4或5所述的光敏劑復合物，其特征在于，所述光敏劑復合物的粒徑分布在30～105nm，所述光敏劑復合物的平均粒徑為48.96nm。
7.一種權利要求4～6任意一項所述光敏劑復合物的制備方法，包括以下步驟：
1)將C60與溴代丙二酸乙酯在甲苯中進行Bingle環加成反應，得到C60丙二酸乙酯衍生物；將所述C60丙二酸乙酯衍生物水解，得到C60-COOH衍生物；
2)將PEG兩端的羥基分別進行氨基化修飾和甲氧醚修飾，得到H2N-PEG-OMe；
3)將所述C60-COOH衍生物與H2N-PEG-OMe混合，攪拌過夜，酯化反應得到偶聯產物C60-PEG；
4)將所述偶聯產物C60-PEG與Ce6混合，超聲振蕩，得到C60-PEG-Ce6；
5)用EDC-HCl和NHS活化所述C60-PEG-Ce6中Ce6表面的羧基，將所述活化后的產物與抗CD33單鏈抗體進行酯化反應得到光敏劑復合物；
所述步驟1)和步驟2)之間沒有時間順序限制。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述步驟1)中水解的溫度為80℃；所述步驟1)的環加成反應和水解反應中獨立地加入NaH。
9.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述步驟4)中的超聲振蕩在乙醇水溶液中進行；所述乙醇水溶液的質量濃度為50％。
10.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述步驟5)的酯化反應在NaHCO3溶液中進行；所述C60-PEG-Ce6與抗CD33單鏈抗體的摩爾比為1：10。
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