[發明專利]人髓過氧化物酶活性及總量檢測試劑盒及檢測方法和制備方法

有效

• 申請號: 201710128460.6
• 申請日: 2017-03-06
• 公開（公告）號: CN106908601B
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發明（設計）人: 仇家舟;陳雪;王朝陽;王岳鵬;黃知音;李玲玲;蔣萍
• 申請（專利權）人: 海格德生物科技（深圳）有限公司
• 主分類號: C12Q1/28
• 分類號: C12Q1/28;G01N33/573
• 代理公司: 深圳市博太聯眾專利代理事務所(特殊普通合伙) 44354
• 代理人: 任轉英

本發明公開一種人髓過氧化物酶活性及總量檢測試劑盒和相應的檢測方法、制備方法，所述檢測試劑盒包括有固相載體、酶分解底物、緩沖液、酶標抗體試劑、校準品、洗滌液、顯色底物和終止液，其中：所述固相載體包被有200～400ng/孔的抗?MPO非抑制性抗體；所述酶分解底物包括有0.1?50mmol/L的H₂O₂；所述酶標抗體試劑含有使用量為1:2000～1:8000的辣根過氧化物酶標記的抗?MPO抑制性抗體；所述校準品包括有MPO抗原含量為0?1000ng/ml的多個校準品；所述顯色底物至少包括含有0.015?0.02％的過氧化物的顯色底物A液和含有0.25?0.32g/L的TMB顯色底物B液。本發明可準確地反應MPO在人體內的情況，為臨床診斷和預警動脈粥樣硬化冠心病，尤其是不穩定型冠心病提供了更準確的依據。

技術領域

本發明涉及體外診斷領域，尤其涉及一種人髓過氧化物酶活性及總量檢測試劑盒和相應的人髓過氧化物酶活性及總量檢測方法、制備方法。

背景技術

人髓過氧化物酶(Myeloperoxidase，MPO)又稱過氧化物酶，是一種重要的含鐵溶酶體，存在于髓系細胞(主要是中性粒細胞和單核細胞)的嗜苯胺藍顆粒中，是髓細胞的特異性標志，是人體免疫系統的一個重要組成部分。在某些炎癥發生的時候，MPO被激活的中性粒細胞和單核細胞釋放，可以將過氧化氫和氯離子轉化為一種可以殺滅微生物的強氧化劑次氯酸(HClO)，以殺滅病原物。

國內外的醫學研究表明，血液中MPO濃度的升高與不穩定型的動脈粥樣斑塊的形成密切相關。在因胸痛而就醫的病人中，血液中MPO濃度的升高表明心血管疾病發生的風險增大。當血液中MPO的濃度高于2990pM時，60％的病人在未來一個月內發生了重大心臟不良事件(心梗、猝死、或緊急進行冠狀動脈搭橋/支架安放手術)。由于血液中MPO水平的升高在心血管疾病發生之前就可以檢測到，使MPO可以作為心血管疾病的預警指標，其預警的靈敏度和準確性要大大優于其他指標如超敏C反應蛋白(hs-CRP)和心肌肌鈣蛋白T(cTnT)。

冠心病是心血管系統中最常見的疾病，而動脈粥樣硬化(AS)又是形成冠心病的重要病理基礎。研究發現，MPO缺陷的個體罹患心血管疾病的危險性明顯下降。MPO水平的升高不僅與患冠狀動脈疾病易感性相關，還可以預測早期患心肌梗死的危險性。MPO水平已被公認為有助于評定急性ST段抬高的心肌梗塞患者的預后。MPO水平對于急性冠脈綜合征(ACS)危險性評估及初步診斷，是一個很好的指標，MPO的檢測意味著在更早的階段發現并及時干預冠心病，可以作為新的預測心血管事件發生的標志物，尤其是針對不穩定型冠心病。因此開發出一種新的用于心腦血管疾病超前預測的檢測試劑盒，能夠提前預測患者病情，及時治療，降低患病風險和患者死亡風險，減輕社會負擔、減輕病人的痛苦，簡化了治療的流程，降低醫生的工作強度，同時也能大大降低國家、醫院以及患者個人的治療費用支出，減輕社會負擔，具有重要的、積極的社會意義。

在現有技術中，用酶聯免疫法測定血液中MPO的含量，間接表明血液中MPO酶活性。這種方案的缺點是有時MPO含量與MPO活性并不相關，如MPO基因變異人群及血液中有MPO抑制物的人群等；直接測定血液MPO酶活性方法是直接加MPO酶底物到樣本中，其中MPO分解合成反應底物，生成顏色反應產物，再測算出MPO酶活性。這種方案的缺點是測定樣本中除了髓過氧化物酶以外，一般還有其他的過氧化物酶存在，對酶活性檢測的結果有很大程度的干擾，大大地降低了樣本中MPO酶活性的特異性。

發明內容

基于此，有必要提供一種新的人髓過氧化物酶檢測方式，來解決MPO含量與MPO活性并不相關的問題，并去除樣本中其他雜質的干擾，大大提高特異性和準確率、縮短測量時間、降低了試劑盒成本，且方便操作。

根據本發明的第一方面，本發明公開一種人髓過氧化物酶活性及總量檢測試劑盒，包括有固相載體、酶分解底物、緩沖液、酶標抗體試劑、校準品、洗滌液、顯色底物和終止液，其中：

所述固相載體包被有200～400ng/孔的抗-MPO非抑制性抗體；