[發(fā)明專利]一種遺傳性耳聾基因檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710128321.3
• 申請日: 2017-03-06
• 公開（公告）號: CN106811533B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葉秋萍;李印淑;劉晶晶
• 申請（專利權(quán)）人: 亞能生物技術(shù)（深圳）有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858
• 代理公司: 深圳市博銳專利事務(wù)所 44275
• 代理人: 張明

1.一種遺傳性耳聾基因檢測試劑盒，其特征在于，包括PCR反應(yīng)液，所述PCR反應(yīng)液包括5管PCR反應(yīng)液，所述5管PCR反應(yīng)液分別為PCR反應(yīng)液A、PCR反應(yīng)液B、PCR反應(yīng)液C、PCR反應(yīng)液D和PCR反應(yīng)液E；所述5管PCR反應(yīng)液均包括：MgCl₂、PCR Buffer、dNTP混合物、Taq酶和UNG酶；

所述PCR反應(yīng)液A包括如下引物和探針：

引物G2F1：5'-TAGTGATTCCTGTGTTGTGTG-3'；

引物G2R1：5'-AGCCTTCGATGCGGACCTTCTG-3'；

內(nèi)參引物GF1：5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3'；

內(nèi)參引物GR1：5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3'；

探針P1：5'-GTTTGTTCACACCCCCCAGGA-Z4-BHQ1

探針P2：5'-CAGCCACAATGAGGATC-3'；

探針P3：5'-TGCAGACAAAGTCGGCCT-3'；

探針P4：5'-TAGCACACGTTCTTGCAGCCTGGCTGCAG-3'；

探針P5：5'-CAGCTGCAGGGCCCATAG-3'；

探針P6：5'-CTTCTCGTCTCCGGTAGGC-Z4-3'；

探針P25：5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3'；

所述PCR反應(yīng)液B包括如下引物和探針：

引物G2F2：5'-GACCTACACAAGCAGCATC-3'；

引物G2R2：5'-TTCAGCAGGATGCAAATTCCAGACAC-3'；

引物G3F1：5'-AGTTCCTCTTCCTCTACCTG-3'；

引物G3R1：5'-CACAGATGGTGAGTACGATGCAGACG-3'；

引物SF1：5'-AAATACCGAGTCAAGGAATG-3'；

引物SR1：5'-GCCTTGAAGGGTAAGCAACCATCTGTC-3'；

引物SF2：5'-GAACACTTTCTCGTATCCAGCAGC-3'；

引物SR2：5'-TCCATCTATATTTTACTTGTAAGTTC-3'；

引物SF3：5'-CACAGCTAAAGATTGTCCTC-3'；

引物SR3：5'-CCATCCCTGGAGCAAGAAGCAACAC-3'；

內(nèi)參引物GF1：5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3'；

內(nèi)參引物GR1：5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3'；

探針P7：5'-AGGCGTTCGTTGCACTTCACCA-3'；

探針P8：5'-CTTCTTGGTAGGTCGGGCAAT-3'；

探針P9：5'-TAGCCCAATACTAACTCCCG-3'；

探針P10：5'-CCTGACTCTGCTGGTTGGAAT-Z4-3'；

探針P11：5'-GATAATAGGGAGAACTCCATTGT-3'；

探針P25：5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3'；

所述PCR反應(yīng)液C包括如下引物和探針：

引物SF4：5'-CTGGATTGCTCACCATTGTCGTCTG-3'；

引物SR4：5'-GTACTAAGAGGAACACCACAC-3'；

引物SF5：5'-TCATCCAGTCTCTTCCTTAG-3'；

引物SR5：5'-AGCCTTCCTCTGTTGCCATTCCTC-3'；

引物SF6：5'-GAGCAATGCGGGTTCTTTGACGAC-3'；

引物SR6：5'-TCTTGAGATTTCACTTGGTTC-3'；

內(nèi)參引物GF1：5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3'；

內(nèi)參引物GR1：5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3'；

探針P12：5'-TTTGTTTTATTTCAGACGAT-3'；

探針P13：5'-CCTGAGAAGATGTTGCTGAT-3'；

探針P14：5'-GCCGTGCGGGAAAGAGCAGTG-3'；

探針P15：5'-TTTGATGGTCCATGATGC-Z4-3'；

探針P25：5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3'；

所述PCR反應(yīng)液D包括如下引物和探針：

引物SF7：5'-AGATTCTTAGATTTTCCAGTCC-3'；

引物SR7：5'-AGAGGGTCTAGGGCCTATTCCTGATTG-3'；

引物SF8：5'-GTGAACGTTCCCAAAGTGCCAATCC-3'；

引物SR8：5'-ATACTGGACAACCCACATC-3'；

引物MF1：5'-CGCGGTCACACGATTAACCCAAGTC-3'；

引物MR1：5'-TGTTAAGCTACACTCTGGTTC-3'；

內(nèi)參引物GF1：5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3'；

內(nèi)參引物GR1：5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3'；

探針P16：5'-ATAAAATACTTACTGTGGACTT-3'；

探針P17：5'-TCCATAGCCTTCTGCTTGACTGTG-Z4-3'；

探針P18：5'-GAGATCACAGCGGGTGGTAAG-3'；

探針P19：5'-ATCACCCCCTCCCCAATA-3'；

探針P20：5'-CCACTATGCTTAGCCCTA-3'；

探針P25：5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3'；

所述PCR反應(yīng)液E包括如下引物和探針：

引物MF1：5'-CGCGGTCACACGATTAACCCAAGTC-3'；

引物MR1：5'-TGTTAAGCTACACTCTGGTTC-3'；

引物MF2：5'-AGGCTCATTCATTTCTCTAAC-3'；

引物MR2：5'-CATGGGGTTGGCTTGAAACCAGC-3'；

引物MF3：5'-CCACAACACAATGGGGCTCACTCAC-3'；

引物MR3：5'-AGGGTGGTTATAGTAGTGTG-3'；

內(nèi)參引物GF1：5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3'；

內(nèi)參引物GR1：5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3'；

探針P21：5'-ACCGCCCGTCACCCTCCTCAA-3'；

探針P22：5'-TAGAGGAGACAAGTCGTAACAT-3'；

探針P23：5'-TTTGCCTAGATTTTATGTATACG-3'；

探針P24：5'-CGACCCCTTATTTACCGA-Z4-3'；

探針P25：5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3'；

其中，探針序列中包含Z4的探針代表此探針為ZNA^TM探針，堿基下方設(shè)有下劃線的為鎖核酸修飾的堿基。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的遺傳性耳聾基因檢測試劑盒，其特征在于，所述探針的5’設(shè)有熒光基團(tuán)，3’設(shè)有淬滅基團(tuán)，所述的熒光基團(tuán)為FAM、TET、CY5、HEX或ROX中的一種；所述的淬滅基團(tuán)為能與熒光基團(tuán)配套的BHQ1、BHQ2或BHQ3基團(tuán)中的一種。