[發(fā)明專利]一種口腔中硫化氫產(chǎn)生菌的定量檢測方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710127320.7
• 申請日: 2017-03-03
• 公開（公告）號: CN106834414A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳敏珊;馮鋒;肖俊芳;黃丹虹
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州薇美姿實業(yè)有限公司
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;C12Q1/04
• 代理公司: 佛山市廣盈專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙)44339
• 代理人: 陳業(yè)勝

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及口腔護(hù)理技術(shù)，尤其涉及口臭、口氣的研究，具體涉及一種口腔中硫化氫產(chǎn)生菌的定量檢測方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

口氣，又名口臭，是人群中常見的一種疾病，發(fā)病原因有全身的和局部的，據(jù)報道發(fā)病原因?qū)儆诳谇粌?nèi)因素的患者占80％，其中牙周炎和齦炎患者各占50％。口腔中的細(xì)菌與唾液、菌斑中的蛋白質(zhì)作用形成硫化氫等揮發(fā)性硫化物是引起口臭的主要原因。口臭氣味的主要成份是揮發(fā)性硫化物，其中90％為硫化氫(H₂S)和甲硫醇。口腔中的細(xì)菌主要有：葡萄球菌、鏈球菌、涎鏈球菌、放線菌、棒狀桿菌、范永球菌、乳酸桿菌、梭形桿菌、螺旋菌、奈瑟菌和伴放線桿菌等，其中數(shù)量最多、最主要的是鏈球菌、葡萄球菌和乳酸桿菌。

產(chǎn)生硫化氫的細(xì)菌主要包括牙齦卟啉單胞菌、齒垢螺旋體和中間普雷沃菌。舌苔上產(chǎn)硫化氫的細(xì)菌主要為韋榮球菌屬、放線菌屬和普雷沃菌屬，口臭患者口腔中這些細(xì)菌的數(shù)量明顯高于健康人群。在半胱氨酸中產(chǎn)生硫化氫的細(xì)菌主要有厭氧消化鏈球菌、微小普雷沃菌、黏液真桿菌、牙周蜈蚣菌、蛛形新月形單胞菌以及擬桿菌屬，在血清中產(chǎn)生硫化氫的細(xì)菌有中間普雷沃菌、洛氏普雷沃菌、牙齦卟啉單胞菌和齒垢密螺旋體。

口臭會給生活帶來諸多困擾，目前評價口臭的方法主要有三種:(1)人的感官評價，主要是通過聞的方式根據(jù)被測試者口氣的嚴(yán)重程度給出評分，但該方法需要有經(jīng)驗的人才能給出較準(zhǔn)確的評分，且人的感官因人而異，帶有很大的主觀性，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性低；(2)細(xì)菌分析法，取舌苔或舌背樣品，用特異性培養(yǎng)基培養(yǎng)，鑒定某些特異菌種并菌落計數(shù)，但該方法要對不同選擇培養(yǎng)基上的菌落進(jìn)行菌種鑒定，步驟繁瑣，實驗周期長；(3)硫化物測定法，主要是使用便攜式硫化物測定儀Halimeter或者氣相色譜法測定硫化物的含量，但儀器設(shè)備資金投入較大，而且對操作人員要求高。

有關(guān)于簡易口臭實驗?zāi)Ｐ偷难芯繄蟮捞岬搅舜姿徙U試紙法，并驗證了醋酸鉛法與Halimeter法的相關(guān)性，實驗證明醋酸鉛試紙變色程度與Halimeter測得的硫化物含量有較好的正相關(guān)性，說明醋酸鉛法在原理上說是一種比較可靠的方法，但是該報道僅僅是通過人的視覺感官對醋酸鉛試紙變色程度進(jìn)行評價來對口臭進(jìn)行簡單地判斷，無法實現(xiàn)細(xì)菌的量化統(tǒng)計和分析，從而無法對口臭進(jìn)行有效地治療。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡單、數(shù)據(jù)可靠、成本低廉的，能夠?qū)谇恢挟a(chǎn)生硫化氫的細(xì)菌進(jìn)行定量檢測的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供上述定量檢測方法的應(yīng)用。

本發(fā)明的上述目的是通過如下方案予以實現(xiàn)的：

一種口腔中硫化氫產(chǎn)生菌的定量檢測方法，該檢測方法包括如下步驟：

步驟1

將胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基或腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基于115℃,高溫蒸汽滅菌20分鐘后，備用；

配制醋酸鉛水溶液、五水合硫代硫酸鈉水溶液和還原型谷胱甘肽水溶液；

步驟2

將步驟1配制的醋酸鉛水溶液、五水合硫代硫酸鈉水溶液和還原型谷胱甘肽水溶液分別經(jīng)過濾除菌處理后加入到步驟1滅菌處理后的培養(yǎng)基中，混合均勻后倒平板；

步驟3

將待測樣品涂布步驟2制備的平板，37℃恒溫培養(yǎng)36～48h后，進(jìn)行菌落計數(shù)。

上述步驟1中，所述胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基采用市售的胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基即可實現(xiàn)本發(fā)明，也可以按照胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基的傳統(tǒng)配方配制：每升胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基含有胰蛋白胨15g、大豆蛋白胨5g、氯化鈉5g和瓊脂15g，pH7.3±0.2，25℃。

上述步驟1中，所述腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基采用市售的腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基即可實現(xiàn)本發(fā)明，也可以按照腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基的傳統(tǒng)配方配制：每升腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基含有牛腦浸粉4g、牛心浸粉4g、蛋白胨5g、酪蛋白胨16g、氯化鈉5g、葡萄糖2g、硫酸氫二鈉2.5g和瓊脂13.5g，pH值7.4±0.2，25℃。

上述步驟1中，醋酸鉛、五水合硫代硫酸鈉和還原性谷胱甘肽均為市售產(chǎn)品。