[發明專利]一種負載生長因子的明膠緩釋微球及其制備方法

在審

• 申請號: 201710126984.1
• 申請日: 2017-03-06
• 公開（公告）號: CN106924196A
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發明（設計）人: 單桂秋;林放;施琳穎;周謀;王玲
• 申請（專利權）人: 廣州軍區廣州總醫院
• 主分類號: A61K9/19
• 分類號: A61K9/19;A61K47/42;A61K38/18;A61P17/02
• 代理公司: 佛山幫專知識產權代理事務所(普通合伙)44387
• 代理人: 胡麗琴

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及一種負載生長因子的明膠緩釋微球及其制備方法。

背景技術

難愈性創面是指在期望的時間內不能正常愈合，是與部位和宿主有關的一類創面。難愈性創面的特點與修復難點在于創面局部缺乏良好的血供，難以生成新鮮血管，而且周圍組織長期反復炎癥刺激，造成纖維組織增生，瘢痕組織形成。由于創面長期不能愈合，皮膚組織缺損易液化感染甚至壞死，常常給患者造成了很大的心理壓力和經濟損失，嚴重影響了患者的身體健康及生活質量。

近年來，使用單一生長因子或者復合生長因子進行治療并制成緩釋微球或制劑的常有報道，但是只針對某種疾病或創面進行愈合，使用范圍局限，難以推廣應用。富血小板血漿(platelet rich in plasma，PRP)在創傷修復領域的表現出色，其富含血小板源性生長因子(platelet-derived growth factor，PDGF)、轉化生長因子β(transforming growth factor beta，TGF-β)、血管內皮生長因子(vascular epithelial growth factor，VEGF)、表皮生長因子(epithe-lial growth factor，EGF)、胰島素樣生長因子(insulin-like growth factor，IGF)等促進創面愈合的生長因子。在PRP中加入凝血酶和鈣離子后可形成血小板凝膠(PG)。PG具有與PRP相同的生長因子，且由血小板和纖維蛋白多聚體構成，其中的血小板激活后，可使血小板脫顆粒釋放α顆粒內豐富的生長因子，分別和相互協同促進組織再生、對創面進行修復。傳統PG降解快，支架不穩定；其包含的生長因子半衰期短、易變性、易酶解，在體內應用時局部擴散快、降解快，從而導致其有效濃度下降，有效作用時間縮短。

緩釋制劑是將藥物賦予一定的載體，通過載體緩慢非恒速釋放藥物的一種制劑。明膠是動物骨或皮中膠原蛋白部分水解的產物，系由18種氨基酸與多肽交聯形成的直鏈聚合物，是一種制備微球的良好的天然聚合物材料，在醫學、化工等領域應用廣泛。明膠微球可作為多種藥物的載體，提高藥物的穩定性、控制藥物釋放、靶向給藥、掩蓋藥物的不良氣味，其用放射性元素或熒光物質標記后可注入體內用于醫學顯影、示蹤研究。由于明膠自身具有溶膠-凝膠特性，因而明膠微球還可作為制備其他材料微球的模板，但目前國內尚無成熟的明膠微球制品。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供一種緩釋效果好、成本低、無毒副作用、具有安全性和實用性、能克服血小板凝膠的相關缺陷的負載生長因子的明膠緩釋微球，進一步提供操作簡單、成本低的制備負載生長因子的明膠緩釋微球的制備方法。

為解決上述問題，采用的技術方案如下：

一方面，本發明提供的一種負載生長因子的明膠緩釋微球，其以血小板復合生長因子為包裹對象，以明膠微球為載體，浸潤膨脹后冷凍干燥制備所得。

進一步地，本發明提供的一種負載生長因子的明膠緩釋微球，其中負載的所述生長因子包括但不限于PDGF-BB、TGF-β、VEGF。

進一步地，本發明提供的一種負載生長因子的明膠緩釋微球，其中負載的所述生長因子包括但不限于PDGF-BB、TGF-β、VEGF、IGF-1、bFGF、EGF等。

進一步地，本發明提供的一種負載生長因子的明膠緩釋微球，所述明膠緩釋微球的平均粒徑為15.95±3.79μm，微球粒徑分布于7～20.5μm。

另一方面，本發明提供一種如上所述的負載生長因子的明膠緩釋微球的制備方法，包括如下步驟：

1)制備空白明膠微球：向盛有液體石蠟的容器中加入Span 80，攪拌均勻后加熱攪拌；再向容器中滴加明膠溶液，攪拌至乳化形成油包水型乳劑；將反應容器轉入冰水浴中，待反應體系完全降溫后，加入戊二醛預固化；預固化完成后，再補加戊二醛并于冰箱中靜置；從冰箱中取出并傾倒出上層清液后，殘余物進行后處理得到空白明膠微球；

2)制備血小板復合生長因子：取靜脈全血，經離心后得PRP，向PRP中加入激活劑，混勻，離心取上層清液得血小板復合生長因子，保存備用；

3)制備明膠緩釋微球：經步驟2)所得血小板復合生長因子加入裝有步驟1)所得空白明膠微球的EP管中，充分浸潤膨脹后進行冷凍干燥即得負載生長因子的明膠緩釋微球。

進一步地，本發明提供一種如上所述的負載生長因子的明膠緩釋微球的制備方法，其中，所述步驟1)向容器中滴加明膠溶液時的攪拌速度為750～825r/min。