[發明專利]一種區分豬鏈球菌爆發菌株和散發菌株的檢測引物和應用

有效

• 申請號: 201710126704.7
• 申請日: 2017-03-03
• 公開（公告）號: CN106868143B
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發明（設計）人: 李錦銓;牛曉娜;王小紅;董星星;李志偉;邱寧;高磊;李偉天;劉園;蘭江風
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12N15/11;C12Q1/04;C12R1/46
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發明公開了一種區分豬鏈球菌爆發菌株和散發菌株的檢測引物和應用，所述的引物為：SS?F：TAACTGATACGCTTGGAT和SS?R：AGATTCCGCATTTCCTCC。該引物能快速區分食品原料、食品、人或動物攜帶的豬鏈球菌中的爆發菌株和散發菌株。本發明通過基因組學和大數據分析方法對檢測靶點進行了高通量篩選，在檢測靶點的選擇上進行了創新，極大提高了檢測的準確性。方法簡單易行，靈敏度高，反應時間短，成本低。

技術領域

本發明屬于食品安全檢測或者病原微生物檢測領域，更具體涉及一種區分豬鏈球菌爆發菌株和散發菌株的檢測引物和應用，本發明提供的引物適用于動植物性產品、制品、公共安全和動物疫病的快速檢測。

背景技術

豬鏈球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一種重要的人畜共患傳染病病原。S.suis不僅導致豬出現腦膜炎、關節炎、肺炎、心內膜炎和敗血癥等癥狀，造成豬只大量死亡，給養豬業造成巨大的經濟損失，還可以通過與感染豬、帶菌豬肉直接接觸而傳染給人，導致人永久性聽力喪失、敗血癥型休克甚至死亡，嚴重威脅著人類的身體健康和生命安全，已引起社會的高度關注。1998年在江蘇南通S.suis造成病死豬10萬余頭，人群感染25例；2005年四川省S.suis造成死亡豬幾千頭，人群感染208例。同期廣東、香港也有病例報導。豬鏈球菌病已成為泰國的重要傳染病，豬鏈球菌也是香港引起腦膜腦炎的第三大病原(僅次于肺炎鏈球菌和結核分枝桿菌)和越南引起腦膜腦炎的第一大病原(Streptococcus suismeningitis:the newest serious infectious disease.J Med Assoc Thai.2008；91(5):654-658；Streptococcus suis infection and risk factors for mortality.JInfect.2008；57(5):392-396；Streptococcus suis:an emerging human threat.JInfect Dis.2009；199(1):4-6.)。盡管該病原在我國引起兩次爆發事件，并且近年來連續報導人和豬感染豬鏈球菌病例，目前仍未有商業化的方法區分豬鏈球菌的爆發菌株和散發菌株。因此，亟需尋找可用于能夠區分爆發菌株和散發菌株的檢測靶點，并建立相應的檢測方法，使得我們能夠對該病原進行監測，防患于未然；也有助于在中國突發公共衛生事件中早期應急處置疫情，進而抑制疫情的爆發和蔓延。

目前豬鏈球菌的檢測方法主要有微生物學方法、生化方法、免疫學方法和分子生物學方法等。微生物學方法和生化方法并不能用于區分不同菌株的致病性，更無法區分爆發菌株和散發菌株。免疫學方法只可用于檢測部分公認的毒力因子，并且需要制備毒力因子相應的抗血清，對操作人員要求較高，這些要求一定程度上限制了該方法的應用。近年來分子生物學的檢測方法的發展較大程度上提高了病原檢測的特異性和靈敏度，減少了檢測時間，已經成為重要的檢測技術。目前常見的分子生物學檢測方法如特異性的核酸探針，熒光實時定量PCR和PCR檢測方法等。盡管不同的分子生物學檢測方法各有利弊，共同需要解決的問題是檢測靶點的選擇。