[發(fā)明專利]用于檢測雞白痢沙門氏菌的特異性引物、含有該引物的試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710126691.3
• 申請日: 2017-03-03
• 公開（公告）號: CN106834500B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于申業(yè);劉思國;曹俊
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/42
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

1.一種用于檢測雞白痢沙門氏菌的特異性引物，其特征在于所述引物由上游引物和下游引物組成，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.含有權(quán)利要求1所述的特異性引物的PCR檢測試劑盒。

3.如權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于還含有PCR擴(kuò)增緩沖液、陽性對照以及陰性對照。

4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述的陽性對照為雞白痢沙門氏菌菌株的基因組DNA或是含有SEQ ID NO.1所示序列的載體；所述的陰性對照為無菌水。

5.如權(quán)利要求2-4任一項所述的試劑盒，其特征在于用于檢測雞白痢沙門氏菌時包括以下步驟：

步驟一，提取待檢樣品基因組DNA，使用權(quán)利要求2-4任一項所述的試劑盒進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

步驟二，瓊脂糖凝膠電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物，判斷樣品是否含有雞白痢沙門氏菌；所述判斷具體為：如果電泳結(jié)果在356bp位置出現(xiàn)單一的擴(kuò)增條帶，則說明樣品中含有雞白痢沙門氏菌；如果沒有出現(xiàn)相應(yīng)的單一擴(kuò)增條帶，則樣品中不含有雞白痢沙門氏菌。

6.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于步驟一中所述PCR擴(kuò)增所采用的檢測體系為25μL反應(yīng)體系包括：2×Premix Ex Taq 12.5μL，10μM的上下游引物各0.5μL，模板溶液1μL，最后滅菌去離子水補(bǔ)足至25μL。

7.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于步驟一中所述PCR擴(kuò)增所采用的擴(kuò)增程序為：先94℃預(yù)變性5min，之后開始擴(kuò)增循環(huán)，每個循環(huán)的程序為：94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，循環(huán)共30個；循環(huán)結(jié)束后，72℃延伸7min，降溫至10℃，結(jié)束。

8.權(quán)利要求1所述的引物或權(quán)利要求2-7所述的試劑盒在制備檢測雞白痢沙門氏菌試劑中的應(yīng)用。

9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述的試劑用于區(qū)別雞白痢沙門氏菌以及其他致病性沙門氏菌血清型。

10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述的其他致病性沙門氏菌血清型包括雞傷寒和腸炎沙門氏菌血清型。