[發明專利]用于類風濕關節炎診斷的試劑盒

在審

• 申請號: 201710126637.9
• 申請日: 2017-03-03
• 公開（公告）號: CN106950367A
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發明（設計）人: 戴冽;馬劍達;莫穎倩;荊俊
• 申請（專利權）人: 中山大學孫逸仙紀念醫院
• 主分類號: G01N33/564
• 分類號: G01N33/564
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司44202
• 代理人: 宋靜娜,郝傳鑫

技術領域

本發明涉及醫藥領域，特別是風濕免疫病學和骨科學領域，尤其是一種用于類風濕關節炎診斷的試劑盒。

背景技術

骨是一種特化的結締組織，作為肌肉的附著點可以支持運動、保護內臟器官和骨髓，還具有代謝功能如儲存和供應體內的鈣。骨組織處于形成-吸收的動態過程中，其中，骨吸收主要由破骨細胞介導。破骨細胞是一種由單核/巨噬前體細胞融合而成的具有骨吸收能力的終末期細胞，是唯一能夠吸收骨質的細胞；破骨細胞的前體細胞是血液系統中的單核細胞，在特定的信號作用下，經歷一系列分化過程最終分化形成成熟的破骨細胞，釋放骨基質降解酶，包括抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、組織蛋白酶K以及基質金屬蛋白酶9等骨基質降解蛋白。當人體破骨細胞分化及成熟異常活躍時，會打破骨形成-吸收平衡，出現全身性或局部性骨侵蝕破壞。全身性骨侵蝕主要表現為骨質疏松癥，可出現疼痛、脊柱變形以及骨折等表現。局部的骨侵蝕破壞主要導致關節畸形，嚴重影響關節功能，最終出現殘疾，如類風濕關節炎。類風濕關節炎是一種常見的以進行性關節破壞為特征的慢性炎癥性致殘性疾病，是導致我國女性肢體殘疾的首要病因。目前對于類風濕關節炎關節破壞的評估主要通過影像學檢查，或者血清學檢查骨破壞相關代謝產物，只能發現已經存在的關節破壞，無法預測類風濕關節炎關節破壞的進展。類風濕關節炎關節破壞的嚴重程度取決于破骨細胞的數量及功能。研究發現人外周血單核細胞在細胞因子RANKL和M-CSF的誘導下可分化為破骨細胞，而在相同的外界環境中類風濕關節炎患者外周血單核細胞較正常人更容易被誘導成破骨細胞，而不同類風濕關節炎患者之間外周血單核細胞分化成破骨細胞的能力也存在差異。如果能找到可以評估人破骨細胞前體細胞(外周血單核細胞)分化成破骨細胞能力的方法，可以為臨床判斷患者是否存在骨吸收-形成失平衡提供指導，以及有助于預測類風濕關節炎患者關節破壞進展，為臨床診療提供指導。

現有的評估人破骨細胞前體細胞(外周血單核細胞)分化成破骨細胞能力的方法為：抽取人外周血并稀釋，以淋巴細胞分離液密度梯度離心分離外周血單個核細胞，貼壁純化后流式細胞術CD14、CD3雙色熒光標記抗體檢測單核細胞純度，在單核細胞培養體系中加入破骨細胞誘導因子M-CSF和RANKL，第0、7、14、21天行TRAP染色，光鏡下觀察TRAP染色陽性且細胞核≥3個的細胞為成熟破骨細胞。將培養體系中人外周血單核細胞在預置了骨片的96孔板中共培養，第21天取出骨片，梯度酒精脫水及1％甲苯胺藍染色，相差顯微鏡觀察骨吸收陷窩情況。通過比較成熟破骨細胞數量及骨陷窩面積評估破骨細胞前體細胞分化成破骨細胞的活性。

上述方法的缺點包括操作復雜，所需時間較長，需要特殊的場地和設備進行細胞培養，容易出現細胞污染導致檢測失敗，結果評估時存在一定的主觀因素。上述缺點主要是因為要進行細胞分離培養，模擬體內的環境加入相關的誘導因子把破骨細胞前體誘導成破骨細胞，并且還要進行染色鑒定和功能實驗。由于誘導培養的時間周期比較長，對操作人員的技術要求高，需要超凈臺、細胞培養箱等專業的設備，因此難以推廣應用。

發明內容

基于此，本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種操作方便、能快速準確診斷受試者類風濕關節炎的試劑盒。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

一種類風濕關節炎診斷試劑盒，所述試劑盒包含用于檢測血液中CD14陽性的單核細胞中PGC1β陽性細胞的試劑。

優選地，所述試劑包含CD14抗體、同型對照抗體、PGC1β抗體和熒光二抗。所述抗體優選是被標記的抗體，例如生物素化的抗體。如本文所用的術語“抗體”是指特異性結合至特定抗原或與特定抗原免疫應答的免疫球蛋白分子，并且包括抗體的多克隆、單克隆、遺傳工程化和以其它方式修飾的形式，包括但不限于嵌合抗體、人源化抗體、異綴合抗體(例如，二-、三-和四-特異性抗體、diabody、triabody和tetrabody)以及抗體的抗原結合片段包括例如Fab'、F(ab')₂、FAB、FV、rIgG和scFv片段；抗體可以包括嵌合的、靈長類化的、人源化的或人抗體；可與本發明相關使用的抗體可使用本領域已知的各種各樣的技術，包括使用動物免疫、雜交瘤、重組和噬菌體展示技術或其組合來制備；可與本發明相關使用的抗體還可從供應商購買獲得。