[發明專利]用于篩選、純化灰葡萄孢菌的改良培養基及其配制方法

在審

• 申請號: 201710125315.2
• 申請日: 2017-03-04
• 公開（公告）號: CN107043710A
• 公開（公告）日: 2017-08-15
• 發明（設計）人: 汪令翔;張從軍;仲松;張印;崔桂俠;梅艷艷;王彬彬
• 申請（專利權）人: 安徽萊姆佳生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645
• 代理公司: 蚌埠鼎力專利商標事務所有限公司34102
• 代理人: 王琪,王玲霞

技術領域

本發明屬于微生物領域，具體是一種用于篩選、純化灰葡萄孢菌的改良培養基及其配制方法。

背景技術

灰霉病是北方的保護地蔬菜非常重要的病害之一，茄科蔬菜以番茄、辣椒和茄子受害最重，20世紀70年代后期，灰霉病在我國發展迅速，危害日益嚴重，在早春造成大量爛果，造成減產普遍達20～30％，嚴重時甚至高達50％左右。農業上對番茄灰霉病的防治投入較大但是效果均不理想，而灰霉病病原菌灰葡萄孢菌又易對殺菌劑產生抗藥性，而且還會帶來環境污染、食品安全、抗藥性等一系列問題。因此對于番茄灰霉病的防治迫切需要一種低毒、高效的防治措施，將病害損失控制在經濟閥值以下。在眾多防治方法中生物防治由于其低殘留、低污染的特性而凸顯出優勢，成為目前研究的重點。

為了推進微生物防治灰霉病工作的發展，快速準確的獲取灰霉病病原菌灰葡萄孢菌成為一項非常重要的工作。

目前培養灰葡萄孢菌常用的培養基是馬鈴薯－蔗糖－瓊脂培養基或馬鈴薯－葡萄糖－麥芽汁－瓊脂培養基等(PDA培養基)，這些培養基不但價格昂貴，培養菌種、孢子的效果還不穩定，且配制使用不方便，篩選效果不明顯。

發明內容

本發明的目的在于解決上述技術問題，提供一種用于篩選、純化灰葡萄孢菌的改良培養基，該改良培養基以易感染灰葡萄孢菌的番茄或圣女果為出發點，番茄中的果酸經高溫煮沸后釋放，使培養基整體的pH維持在3～4(灰葡萄孢菌的最適宜生長pH為3.5)，在促進灰葡萄孢菌生長的同時還能抑制雜菌的生長，而且番茄中含的中、微量元素，也能加快灰葡萄孢菌的生長，有利于灰葡萄孢菌的篩選和純化。

為解決上述技術問題，本發明提供一種用于篩選、純化灰葡萄孢菌的改良培養基，每1000mL培養基包含以下原料配方：番茄或圣女果300g、速效碳源20～30g、速效氮源20～30g、蒸餾水1000mL，其中速效碳源為葡萄糖，速效氮源為蛋白胨或玉米漿水解液。

優選地，每1000mL培養基包含以下原料配方：番茄或圣女果300g、葡萄糖20g、蛋白胨25g、蒸餾水1000mL或每1000mL培養基包含以下原料配方：番茄或圣女果300g、葡萄糖25g、玉米漿水解液30g、蒸餾水1000mL。

當需要配制固體培養基時需要添加瓊脂粉30～40g，而配制液體培養基不需要瓊脂粉。

為簡單說明問題起見，以下對本發明所述的用于篩選、純化灰葡萄孢菌的改良培養基均簡稱為本發明的改良培養基。

灰霉病高發于果蔬果實體上，故本發明選取容易感染灰葡萄孢菌的番茄或圣女果作為改良培養基的出發點，每100g新鮮的番茄中含有的營養物質如下：鈣8mg～10mg；脂肪0.2g～0.3g；碳水化合物2g～4g；磷22mg～26mg；鐵0.6mg～0.9mg；鎂15mg～18mg；鉀240mg～270mg；鈉8mg～10mg；胡蘿卜素0.3mg～0.5mg；維生素B 0.04mg；硫胺素0.3mg～0.4mg；核黃素0.01mg～0.02mg；煙酸0.5mg～0.7mg；維生素C 10mg～25mg；蛋白質含量為0.7g～0.9g，所含的糖主要是葡萄糖和果糖，果酸主要是檸檬酸和蘋果酸。圣女果作為番茄的一個品種，其營養組分與番茄大體一樣，但是圣女果果實較小，可避免在配制較小量培養基時因切取其中的某一部分造成的營養成分與整個果實有差別，所以本發明優選圣女果作為改良培養基的原料。

番茄(或圣女果)中豐富的中、微量元素能促進灰葡萄孢菌的孢子生長，使菌株生長成熟；豐富的果酸(其中主要為檸檬酸和蘋果酸)配合滅菌時產生的高溫能在一定程度上促進玉米漿水解液中不完全分解的多肽進一步分解為氨基酸，提高氮源的利用率；番茄堿是一種高效抗菌物，在篩選灰葡萄孢菌的過程中能抑制雜菌的生長，同時，高溫煮沸后，番茄中的大量果酸得以釋放，使培養基整體的pH維持在3～4(灰葡萄孢菌的最適宜生長pH為3.5)，在促進灰葡萄孢菌快速生長的同時，也能抑制雜菌的生長，有利于灰葡萄孢菌的篩選、純化。