[發明專利]一種角膜基質、制備方法與應用

有效

• 申請號: 201710125099.1
• 申請日: 2017-03-03
• 公開（公告）號: CN107050515B
• 公開（公告）日: 2020-01-21
• 發明（設計）人: 趙博;夏磊磊;王洪權;趙延瑞;李學軍;張晉輝
• 申請（專利權）人: 北京博輝瑞進生物科技有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/50
• 代理公司: 33228 寧波市鄞州甬致專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 沈春紅

1.一種角膜基質，其特征在于：采用動物的眼角膜為原料，去除角膜上皮層、角膜基質中的細胞成分和DNA成分，保留前彈力層和部分厚度角膜基質，保留完整的細胞外基質成分；所述角膜基質通過以下步驟制備：

(1)原料處理：取動物的眼球，取角膜、清洗后浸泡于純化水中；

(2)凍融溶脹：角膜先用水浸泡，再冷凍；冷凍后取出、待完全解凍后用純化水沖洗，然后再浸泡；重復上述冷凍、解凍過程多次，得到吸水膨脹的角膜；

(3)病毒滅活：采用過氧乙酸-乙醇溶液浸泡角膜進行病毒滅活；

(4)清洗過程：分別用PBS溶液和純化水在超聲裝置中處理角膜；其中，PBS溶液pH6-8、溶液溫度為10-40℃，PBS溶液與角膜的體積比為(30-60)︰1，清洗2-4次，每次10-30min；然后采用10-40℃的注射用水清洗，注射用水與角膜體積比為(30-60)︰1，至檢測電導率為10μs/cm以下終止；

(5)免疫原去除：免疫原去除液為PBS溶液，所述PBS溶液中包含胰蛋白酶和EDTA，角膜的免疫原去除過程在多頻超聲裝置中進行；其中，免疫原去除液中胰蛋白酶質量百分比濃度為0.01-0.2％，EDTA的濃度0.1-1mmol/L，免疫原去除液的pH值為7-8；多頻超聲裝置提供至少包括兩個超聲頻率，低頻頻率范圍為20-40KHz，高頻頻率為60-90KHz，其中低頻處理5-40min，高頻處理5-40min，溫度范圍為20-35℃；

(6)清洗過程：分別用PBS溶液和純化水在超聲裝置中處理角膜；

(7)重復步驟(5)和(6)多次，然后將角膜浸泡在純化水中；

(8)切削取材：在解剖鏡下使用角膜板層刀，切取角膜前彈力層和部分基質、然后將其浸泡于純化水中；

(9)烘干干燥：將角膜平展在支撐件表面，放置在烘箱中進行干燥獲得角膜基質。

2.根據權利要求1所述的角膜基質，其特征在于：所述動物為哺乳動物。

3.根據權利要求2所述的角膜基質，其特征在于：所述哺乳動物為豬或牛。

4.根據權利要求1所述的角膜基質，其特征在于：所述的部分厚度角膜基質為與前彈力層相連的具有一定厚度的角膜基質，所述的細胞外基質包括膠原蛋白和糖胺聚糖。

5.根據權利要求4所述的角膜基質，其特征在于：

所述膠原蛋白為I型膠原蛋白和IV型膠原蛋白，所述I型膠原蛋白和IV型膠原蛋白的含量為85-90％；

所述糖胺聚糖為硫酸軟骨素和硫酸角質素；

所述角膜基質為直徑7-10mm，厚度0.1-0.2mm的圓片；

所述去除角膜上皮層、角膜基質中的細胞成分和DNA成分是指所述細胞殘留量為0個、DNA殘留量小于10ng/mg、半乳糖甘酶清除率為99％以上。