[發明專利]以幽門螺旋桿菌23SrRNA基因的2143位點有突變為模板的陽性質控品

在審

• 申請號: 201710123370.8
• 申請日: 2017-03-03
• 公開（公告）號: CN106755539A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 孫茜
• 申請（專利權）人: 踏石生物科技（蘇州）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司32103
• 代理人: 馬明渡,楊超

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，具體涉及一種以幽門螺旋桿菌23S rRNA基因的2143位點有突變為模板的陽性質控品，該陽性質控品用于驗證幽門螺旋桿菌耐藥基因檢測試劑盒在應用于樣本檢測時樣本是否為陽性的輔助判斷。

背景技術

質控品是指用于體外診斷的質量控制物質，其具有已知濃度含量的目標檢測物，為使人們確信某一產品或服務質量能滿足規定的質量要求所必須的產品。質控品的使用目的是為了驗證整個PCR反應過程具有準確性、有效性和特異性，并監控檢測系統的狀態。儀器在正式投入使用后，應定期對其校準，避免由于儀器原因導致的實驗偏差。再次，在收到每批新試劑后，應首先對其進行預實驗，確證新試劑質量后，再用于對臨床標本的檢測。

但是據申請人了解，目前在檢測突變型幽門螺桿菌23S rRNA基因質量控制方面沒有陽性質控品。

發明內容

本發明旨在提供一種以幽門螺旋桿菌23S rRNA基因的2143位點有突變為模板的陽性質控品，用于驗證被檢樣本中幽門螺桿菌23S rRNA基因2143位點是否突變這一檢測結果是否準確，解決了幽門螺桿菌23S rRNA基因的質量檢測問題。

為達到上述目的，本發明采用的技術方案是：一種以幽門螺旋桿菌23S rRNA基因的2143位點有突變為模板的陽性質控品，該陽性質控品是一種以堿基序列為主要成分的試劑，該堿基序列包含幽門螺旋桿菌的23S rRNA基因2143位點有突變的基因片段，該基因片段為5’-GTCGGTTAAATACCGACCTGCATGAATGGCGTAACGAGATGGGAGCTGTCTCAACCAGAGATTCAGTGAAATTGTAGTGGAGGTGAAAATTCCTCCTACCCGCGGCAAGACGGAGAGACCCCGTGGACCTTTACTACAACTTAGCACTGCTAATGGGAATATCATGCGCAGGATAGGTGGGAGGCTTTGAAGTAAGGGCTTTGGCTCTTATGGAGCCATCCTTGAGATACCACCCTTGAT-3’， 其中，帶有下劃線的堿基位點是幽門螺旋桿菌的23S rRNA基因的2143位點，用于表征2143變異型的幽門螺旋桿菌的23S rRNA基因的位點。

上述技術方案中的有關內容解釋如下：

1、上述方案中，所述陽性質控品中還含有緩沖試劑，該緩沖試劑為pH 為7.6的Tris-Hcl緩沖液、純化水以及pH 為8.0的TE緩沖液中的任意一種。

2、上述方案中，所述陽性質控品中含有的幽門螺旋桿菌23S rRNA基因2143位點有突變的基因序列是構建到質粒載體上保存，根據現有技術即可得到，質粒構建過程如下：

引物設計——pcr擴增——割膠回收DNA片段——構建載體——轉化培養——陽性克隆鑒定——37℃搖床培養——質粒抽提——測序確認堿基序列。

抽提后的質粒再配制成所述陽性質控品，配制方法如下：

（1）配制稀釋液：加入50%配方量的純化水→加入Tris-Hcl緩沖液（pH7.6）→加入剩余的純化水（渦旋震蕩3次，每次5秒）→得0.002mol/L的Tris-HCl（pH 7.6）稀釋液；

（2）HP質粒（2143位點突變）預稀釋：加入50%配方量的稀釋液→加入HP質粒（2143位點突變）溶液→加入剩余的稀釋液（渦旋震蕩3次，每次5秒）→得到X拷貝/微升HP質粒（2143位點突變）溶液；

（3）得到陽性質控品：加入50%配方量的稀釋液→加入X拷貝/微升HP質粒（2143位點突變）溶液→加入剩余的稀釋液（渦旋震蕩3次，每次5秒）→得到陽性質控品。

本發明的特點以及有益效果是：所述陽性質控品實質是事先設計好的、當做已知濃度及堿基序列的樣本，和其他被檢樣本（例如胃粘膜組織、胃液或牙菌斑）一起利用相關的幽門螺旋桿菌23S rRNA基因檢測試劑盒進行檢測，從而驗證被檢樣本檢測結果的準確性。也就是說，在利用幽門螺旋桿菌23S rRNA基因檢測試劑盒檢測被檢樣本時，本發明的陽性質控品相當于是一種已知濃度的陽性樣本，用于驗證幽門螺旋桿菌23S rRNA基因檢測試劑盒的檢測結果（即幽門螺桿菌23S rRNA基因上第2143位點變異這一檢測結果）是否真實、有效，解決了幽門螺桿菌23S rRNA基因的質量檢測問題。

附圖說明

附圖1為幽門螺旋桿菌菌群陽性及23S rRNA基因2142和2143位點無突變時的熒光定量PCR擴增熔解曲線圖；