[發明專利]EB病毒VCA/EA?IGA細胞免疫熒光檢測試劑

在審

• 申請號: 201710121203.X
• 申請日: 2017-03-02
• 公開（公告）號: CN106950372A
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發明（設計）人: 曹益彬;胡洪海;黃文喜;林琴;葉晶龍;謝文鋒
• 申請（專利權）人: 廣州市康潤生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/569;G01N33/533;G01N33/52
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 趙蕊紅

1.一種EB病毒VCA/EA-IGA細胞免疫熒光檢測試劑，其特征在于：主要成分包括細胞片、熒光二抗FITC-IgA、陽性對照質控品、陰性對照質控品、封片劑、PBS粉劑和蓋玻片。

2.根據權利要求1所述的EB病毒VCA/EA-IGA細胞免疫熒光檢測試劑，其特征在于：

細胞片的制備過程如下,

(1)建立細胞系

(1.1)培養液的設置：以RPMI1640為基礎培養基，添加10％～15％的胎牛血清，調整培養液PH初始值為7.2～7.4；

(1.2)建立B95-8細胞系和Raji細胞系

B95-8細胞系的建立工藝是：將B95-8細胞放于上述培養液中，置于35～37℃含3～6％CO₂的培養箱中培養，建立表達效率穩定均一的B95-8細胞系；

Raji細胞系的激活工藝是：在500～1000rpm的條件下離心5～10分鐘收集Raji細胞，用新的培養液重懸Raji細胞，并調整Raji細胞深度為(1～3)×10⁶個/ml，增加正丁酸鈉至終濃度為0.1～1mM，增加TPA至終濃度為10～100ng/ml，并置于35～37℃含3～6％CO₂的培養箱中培養12～48h，即建立了表達效率穩定均一的Raji細胞系；

(2)細胞片的均一性控制

涂片的細胞控制傳代在50代以內，以細胞裂解個數少于5％為標準，以相同的涂片工藝進行涂片。

3.根據權利要求2所述的EB病毒VCA/EA-IGA細胞免疫熒光檢測試劑，其特征在于：

(1)建立細胞系

(1.1)培養液的設置：以RPMI1640為基礎培養基，添加12％～14％的胎牛血清，調整培養液PH初始值為7.3；

(1.2)建立B95-8細胞系和Raji細胞系

B95-8細胞系的建立工藝是：將B95-8細胞放于上述培養液中，置于36℃含5％CO₂的培養箱中培養，建立表達效率穩定均一的B95-8細胞系；

Raji細胞系的激活工藝是：在600～900rpm的條件下離心6～8分鐘收集Raji細胞，用新的培養液重懸Raji細胞，并調整Raji細胞深度為2×10⁶個/ml，增加正丁酸鈉至終濃度為0.3～0.5mM，增加TPA至終濃度為30～80ng/ml，并置于36℃含5％CO2的培養箱中培養15～36h，即建立了表達效率穩定均一的Raji細胞系。

4.根據權利要求1或2或3所述的EB病毒VCA/EA-IGA細胞免疫熒光檢測試劑，其特征在于：

稀釋的熒光二抗FITC-IgA、陽性對照質控品、陰性對照質控品在2～8℃的條件下均可穩定12個月。

所述熒光二抗FITC-IgA、陽性對照質控品或陰性對照質控品的稀釋液含有穩定劑；

以稀釋液重量份為1，穩定劑含有如下重量百分比的成分：

甘氨酸 1％～5％、

海澡糖 1％～5％、

BSA 1％～5％、

PBS 1％～3％。

5.根據權利要求4所述的EB病毒VCA/EA-IGA細胞免疫熒光檢測試劑，其特征在于：

穩定劑含有如下重量百分比的成分：

甘氨酸 2％～3％、

海澡糖 1％～4％、

BSA 2％～3％、

PBS 2％～2.5％。

6.根據權利要求5所述的EB病毒VCA/EA-IGA細胞免疫熒光檢測試劑，其特征在于：

以重量百分比計，所述封片劑含有：

甘油 10％～30％；

熒光保護劑 3～8％；

PBS 50％～90％。

7.根據權利要求6所述的EB病毒VCA/EA-IGA細胞免疫熒光檢測試劑，其特征在于：

以重量百分比計，所述封片劑含有：

甘油 15％～20％；

熒光保護劑 5～7％；

PBS 65％～80％。

8.根據權利要求7所述的EB病毒VCA/EA-IGA細胞免疫熒光檢測試劑，其特征在于：

成品結構為在一載玻片上具有12孔疏水圓孔的結構，12孔疏水圓孔呈兩列設置，每列均為6個。