[發明專利]一種利用木質纖維素發酵生產L?乳酸的方法

在審

• 申請號: 201710120933.8
• 申請日: 2017-03-02
• 公開（公告）號: CN106834368A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 陳璐;王騫
• 申請（專利權）人: 江蘇迪因生物科技有限公司
• 主分類號: C12P7/56
• 分類號: C12P7/56;C12P19/14;C12P19/02;C12R1/07
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司32243
• 代理人: 盧海洋

1.一種利用木質纖維素發酵生產L-乳酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）凝結芽孢桿菌發酵種子培養：將凝結芽孢桿菌接種于培養基平板，置于45℃-55℃恒溫培養箱中培養12 h -24h，將長好的凝結芽孢桿菌接到液體培養基中，培養條件為溫度45℃-55℃，轉速150rpm-250rpm，培養時間12 h -24h，通氣速率 1vvm；

（2）農作物秸稈或能源植物預處理：將農作物秸稈或能源植物粗粉碎，與自來水混合，攪拌均勻后加入到蒸汽爆破罐中，通飽和蒸汽加熱到180℃-210℃，維持2 min -30min，泄壓，收集蒸汽爆破后的物料，烘干備用；

（3）同步糖化發酵產L-乳酸：在發酵罐中加入發酵培養基成分，加入步驟（1）培養的凝結芽孢桿菌發酵種子液和步驟（2）中經過蒸汽爆破預處理后的農作物秸稈或能源植物，每克預處理底物添加20FPU的纖維素酶，然后在45℃-55℃，100rpm-200rpm轉速條件下糖化發酵48 h -72h，發酵過程中利用氫氧化鈣調節pH，定時取樣測定發酵液中乳酸濃度。

2.根據權利要求1所述的一種利用木質纖維素發酵生產L-乳酸的方法，其特征在于，步驟（1）中使用的液體培養基組成為：葡萄糖 20g/L，酵母粉10 g/L，氯化鈉 2 g/L，磷酸二氫鉀 2 g/L，七水合硫酸鎂0.2 g/L，一水合硫酸錳0.05 g/L，七水合硫酸亞鐵0.01 g/L。

3.根據權利要求1所述的一種利用木質纖維素發酵生產L-乳酸的方法，其特征在于，步驟（2）中使用的農作物秸稈包括玉米秸稈或油菜秸稈，能源植物為芒草。

4.根據權利要求1所述的一種利用木質纖維素發酵生產L-乳酸的方法，其特征在于，步驟（3）中預處理后農作物秸稈添加量為150g/L-200g/L，凝結芽孢桿菌發酵種子液接種量為10%（v/v）。

5.根據權利要求1所述的一種利用木質纖維素發酵生產L-乳酸的方法，其特征在于，步驟（3）中發酵培養基成分為：玉米漿10 g/L，硫酸銨 2g/L，磷酸二氫鉀 2 g/L，七水合硫酸鎂0.2 g/L，一水合硫酸錳0.05 g/L，七水合硫酸亞鐵0.01 g/L。

6.根據權利要求1所述的一種利用木質纖維素發酵生產L-乳酸的方法，其特征在于，步驟（3）中乳酸濃度的測定方法是取發酵液離心，離心后的上清液稀釋后用微孔濾膜過濾，濾液進高效液相色譜檢測。