[發明專利]用作酶聯試劑盒包被抗原的麻疹病毒裂解液的制備方法

在審

• 申請號: 201710119967.5
• 申請日: 2017-03-02
• 公開（公告）號: CN107085095A
• 公開（公告）日: 2017-08-22
• 發明（設計）人: 李華;鄒昌勇;何衛華;龔華岳;韓曉娟;楊婷婷;王邦洲
• 申請（專利權）人: 江蘇華冠生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所32237
• 代理人: 龔擁軍

技術領域

本發明涉及臨床實驗領域，尤其涉及一種用作酶聯試劑盒包被抗原的麻疹病毒裂解液的制備方法。

背景技術

麻疹病毒屬副粘病毒科(FamilyParamyxoviridae)麻疹病毒屬(GenusMorbillivirus)，為負鏈RNA病毒，與其它的副粘膜病毒不同之處為無特殊的神經氨酸酶，呈球型，直徑只有100-250nm，螺旋對稱，有包膜，包膜上含血凝素。基因組全長約16kb,基因組有N、P、M、F、H、L六個基因，分別編碼六個結構和功能蛋白：核蛋白NP、磷酸化蛋白P、膜蛋白M、融合蛋白F(fusion protein,F)、血凝素蛋白H(haemagglutinin protein,H)，依賴RNA的RNA聚合酶（Large polymerase,L）.它們的成分都是糖蛋白。

麻疹是由麻疹病毒感染引起、多見于兒童的急性傳染病，傳染性極強，其臨床特征為發熱、流鼻涕、咳嗽、眼結合膜炎，出現特殊的麻疹黏膜斑和廣泛的皮膚斑丘疹。麻疹病毒主要通過呼吸道飛沫或直接接觸感染者的鼻或咽喉分泌物而傳播，最多見的并發癥為支氣管肺炎、心肌炎、喉炎及耳炎，其它可發生腦炎、亞急性硬化性全腦炎、心血管機能不全以及結核病變播散等。患者在感染麻疹病毒后可獲得終生免疫力，因為機體產生抗血凝素蛋白H中和抗體。

預防麻疹流行的有效措施主要是接種麻疹疫苗。我國自1965年開始普種麻疹減毒活疫苗后麻疹發病率和病死率已明顯降低，麻疹大流行得到完全控制。但是，由于人口流動增加，部分兒童麻疹疫苗漏種，或免疫失敗，加之初免后隨著年齡增長而免疫力逐漸降低等原因，致使麻疹小規模流行時有發生。現在我國免疫規劃已將麻疹減毒活疫苗列入常規免疫程序，每年大約有數千萬兒童接受免疫接種。為了更好地開展消除麻疹的工作，必須對麻疹疫苗的群體免疫效果進行評價。

評價疫苗免疫效果最可靠的方法就是檢測接種者體內血清中的特異抗體的含量。抗體檢測是評價某個地區群體流行病學的主要依據，也是評價某個個體對某種疾病是否達到有效保護的依據。當前市場上檢測麻疹抗體的商品化試劑盒多采用酶聯免疫法和化學發光法，這些方法靈敏度高、結果準確、進一步開發可以對抗體進行定量檢測，抗體檢測中需采用到某種相關的病原體作為抗原，而抗原的質量極大的影響到檢測的結果，包括特異性及敏感性的檢測結果。

目前常用的抗原多數為全病原體（病毒或細菌）或基因工程技術表達的某個蛋白片段。以全病毒作為包被抗原需要對病毒培養液進行濃縮和多步驟純化，抗原病毒的純化難度較大、成本較高，且全病毒抗原在酶標板上固定困難。

血凝素蛋白H含有細胞受體結核位點，可與易感細胞的特異性受體相結合，使病毒吸附在細胞表面，在病毒感染細胞過程中起重要作用，H蛋白抗體可中和病毒感染。在基因工程麻疹疫苗研制中，H蛋白基因、F蛋白基因是首選的病毒抗原。使用重組抗原來代替天然全病毒抗原，成本更高，且基因工程技術表達的重組麻疹病毒結構和功能蛋白片段往往抗原決定簇組分不全。另外，利用大腸桿菌原核表達、分離純化收獲的重組抗原含有大腸桿菌的其它雜蛋白，然而受過大腸桿菌感染的人，血清中的抗大腸桿菌抗體可和這些雜蛋白結合產生反應而引起假陽性，這些雜蛋白容易影響到檢測結果。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供用作酶聯試劑盒包被抗原的麻疹病毒裂解液的制備方法，通過采用麻疹病毒裂解液作為包被抗原，提高現有試劑的質量。本發明所述的用作酶聯試劑盒包被抗原的麻疹病毒裂解液的制備方法，包括：

S1、采用麻疹病毒減毒株，培養麻疹病毒液；

S2、經過超濾方法分離出所述麻疹病毒的濃縮液；

S3、在所述麻疹病毒的濃縮液中加入麻疹病毒抗原保護液，調整為麻疹病毒原液保存備用；

S4、所述麻疹病毒原液經裂解處理后，加入樣品稀釋液稀釋，得到麻疹疫苗接種效果評價IgG抗體檢測試劑。

進一步的，所述麻疹病毒抗原保護液為含磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、檸檬酸三鈉、蔗糖、疊氮鈉的混合水溶液，其配方為：超純水1 L、磷酸氫二鈉45.72g、磷酸二氫鈉40.624g、檸檬酸三鈉8.5g、蔗糖10g、疊氮鈉1g。

進一步的，所述樣品稀釋液為含磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉和疊氮鈉的混合水溶液，其配方為：超純水1L、磷酸氫二鈉5.72g、磷酸二氫鈉0.624g、氯化鈉8.5g、PEG6000（聚乙二醇） 80g、疊氮鈉0.5g。