[發明專利]一種壇紫菜雙單倍體育種的方法

在審

• 申請號: 201710119818.9
• 申請日: 2017-03-01
• 公開（公告）號: CN106857237A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 謝潮添;陳昌生;徐燕;紀德華
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: A01H1/08
• 分類號: A01H1/08;A01H1/02
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙)35200
• 代理人: 馬應森

1.一種壇紫菜雙單倍體育種的方法，其特征在于包括以下步驟：

1)選擇雜交親本；

2)分別促使兩親本成熟的純系絲狀體放散殼孢子，收集殼孢子于消毒海水中培養以獲得親本葉狀體；

3)培養親本葉狀體后，分別選擇健康的雌雄葉狀體作為親本，進行雜交實驗；

4)進行雌雄葉狀體的混合培養，再去掉雄性葉狀體，保留雌性葉狀體進行單棵培養，直至果孢子放出為止；

5)將收集到的果孢子單個培養于試管中，直至萌發成雜合絲狀體，再用組織粉碎機將絲狀體藻落打碎后，繼續培養；

6)待雜合絲狀體長至足夠量時，取出部分絲狀體進行促熟，并促使成熟的雜合絲狀體釋放殼孢子，收集到的殼孢子經篩絹過濾后，置于培養瓶中培養，獲得F1代葉狀體；

7)F1代葉狀體培養后，挑出葉狀體，于解剖鏡下觀察，分別取各個不同顏色的藻塊放置于葡萄糖溶液中浸泡，然后再轉移至海螺酶溶液中酶解，觀察細胞解離狀況，當在顯微鏡下觀察到藻體碎片游離出大量單細胞或多細胞團時，挑取單個細胞置于96孔板的F1培養液中培養；

8)用消毒海水更換1/2F1培養液，直至培養液恢復為正常的消毒海水，再繼續培養，即可看到96孔板中單倍體的單細胞被誘導成了雙倍體的純系絲狀體，即雙單倍體誘導成功；

9)將96孔板中的純系絲狀體分別吸出置于廣口瓶中靜水擴大培養，并作為種質保存；

10)待純系絲狀體長至足夠量時，取出部分絲狀體進行促熟，待絲狀體成熟后，促使成熟的純系絲狀體放散殼孢子，收集殼孢子于消毒海水中培養，獲得F2代純系葉狀體；

11)對F2代純系葉狀體進行性狀測定和評價，從中挑選出符合育種預期的純系經中試應用確認性狀穩定后，即完成壇紫菜雙單倍體育種。

2.如權利要求1所述一種壇紫菜雙單倍體育種的方法，其特征在于在步驟1)中，所述選擇雜交親本，是選擇各具不同優良性狀、不同性別的壇紫菜純系藻體作為雜交親本，且兩個親本藻體的顏色應能明顯區分。

3.如權利要求1所述一種壇紫菜雙單倍體育種的方法，其特征在于在步驟2)中，所述分別促使兩親本成熟的純系絲狀體放散殼孢子是用充氣加水流刺激法分別促使兩親本成熟的純系絲狀體放散殼孢子；所述培養的條件為：溫度20±1℃，光照1000Lx，12L:12D；在步驟3)中，所述培養親本葉狀體可培養50d。

4.如權利要求1所述一種壇紫菜雙單倍體育種的方法，其特征在于在步驟4)中，所述進行雌雄葉狀體的混合培養是按1︰1的比例進行雌雄葉狀體的混合培養；所述再去掉雄性葉狀體，可2周后再去掉雄性葉狀體；所述單棵培養的條件可為：溫度20±1℃，光照1000Lx，12L:12D。

5.如權利要求1所述一種壇紫菜雙單倍體育種的方法，其特征在于在步驟5)中，所述繼續培養的條件為：溫度20±1℃，光照1000～2000Lx，12L:12D。

6.如權利要求1所述一種壇紫菜雙單倍體育種的方法，其特征在于在步驟6)中，所述促熟的培養條件為：溫度28±1℃、光強1000Lx，光周期8L：14D；所述促使成熟的雜合絲狀體釋放殼孢子可用充氣加水流刺激法促使成熟的雜合絲狀體釋放殼孢子；所述篩絹可采用網孔為50μm的篩絹；所述培養的條件可為：溫度20±1℃，光照1000Lx，12L:12D。