[發明專利]一組用于檢測牛白血病病毒的引物及試劑盒

有效

• 申請號: 201710119811.7
• 申請日: 2017-03-02
• 公開（公告）號: CN106801108B
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發明（設計）人: 王成明;黃文江;張榕
• 申請（專利權）人: 鎮江威特藥業有限責任公司;慧盛科技研發（鎮江）有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 代芳

本發明涉及一組檢測牛白血病病毒的引物及其試劑盒和檢測方法，屬于牛白血病病毒檢測技術領域。本發明提供了一組用于檢測牛白血病病毒的引物，包括外引物對、內引物對和環引物對；所述外引物對的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述內引物對的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；所述環引物對的序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。本發明提供的引物及其試劑盒和檢測方法能夠實現牛白血病病毒的高特異性、敏感性檢測。

技術領域

本發明涉及牛白血病病毒檢測技術領域，尤其涉及一組用于檢測牛白血病病毒的引物及試劑盒。

背景技術

牛白血病是由牛白血病病毒引起的牛的一種慢性腫瘤性疾病。病的特征為淋巴樣細胞惡性增生、進行性惡病質和全身淋巴結腫大，病死率高。目前用于牛白血病病毒檢測的技術有電鏡檢測、血清學檢測、分子生物學檢測等。

但電鏡檢測操作繁瑣，需要固定、脫干、墊入、分割和染色等一系列步驟，耗時相對較長。同時由于微生物種類繁多，有一定的主觀性，對于操作人員要求較高，并且需要特殊儀器，不易在基層和大規模的檢測。

血清學檢測方法抗原上必須存在與所用抗體結合的抗原決定簇，使抗原抗體能夠產生特異性的結合反應。基因突變，核苷酸相位改變等因素會導致某些位點的不表達或者結合位點的阻斷，影響抗體與抗原的結合，造成假陰性結果。抗原抗體結合遵循一定的量比關系，只有當二者濃度比例適當時才出現可見反應，并且會受外界因素影響。操作過程中對樣品要求較高，需要及時分離血清，溶血也會對結果造成不利影響。血清學實驗的假陽性和假陰性是不能完全避免的，靈敏度并不高并且檢測耗時長、操作復雜。

PCR是目前在病原檢測中最常用的方法。但普通PCR和巢式PCR都需要結合瓊脂糖凝膠電泳試驗進行結果的判定，操作較為繁瑣且耗時較長，無法達到快速檢測的效果。實時熒光定量PCR對儀器要求較高，無法大規模的推廣。

發明內容

本發明的目的在于提供一組用于檢測牛白血病病毒的引物及試劑盒。本發明提供的檢測牛白血病病毒的引物及試劑盒能夠實現牛白血病病毒的高特異性、高靈敏度檢測，操作簡單、結果肉眼可測。

本發明提供了一組用于檢測牛白血病病毒的引物，包括外引物對、內引物對和環引物對；所述外引物對的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述內引物對的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；所述環引物對的序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

本發明還提供了一種基于上述技術方案所述引物的試劑盒，包括：8000U/mLBst2.0DNA聚合酶；5×Buffer；10mM dNTPs；上述技術方案所述引物；鈣黃綠素熒光顯色劑；牛白血病病毒陽性DNA模板；

所述5×Buffer包括：100mM且pH值為8.8的Tris-HCl、250mM的氯化鉀、50mM的硫酸銨、40mM的硫酸鎂和體積百分濃度為0.1％的吐溫-20；

所述鈣黃綠素熒光顯色劑包括鈣黃綠素和錳離子。

優選的是，100次規格的試劑盒包括2mL 5×Buffer，1.2mL上述技術方案所述引物；0.4mLBst 2.0DNA聚合酶，1.4mL 10mM dNTPs，0.4mL鈣黃綠素熒光顯色劑、0.4mL牛白血病病毒陽性DNA模板。

本發明提供了一組用于檢測牛白血病病毒的引物。本發明提供的檢測牛白血病病毒的引物能與牛白血病病毒保守區域的不同部位結合，特異性高，單個反應可擴增10個拷貝的牛白血病病毒。本發明的引物結合試劑盒應用在環介導恒溫擴增反應中能夠實現牛白血病病毒的高特異性、高靈敏度檢測，操作簡單、結果肉眼可測。

附圖說明

圖1為本發明實施例1提供的LAMP方法特異性檢測結果圖；