[發(fā)明專利]一種礬根葉片的組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基及繁殖方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710118920.7 | 申請日： | 2017-03-02 |
| 公開（公告）號： | CN106942051B | 公開（公告）日： | 2019-03-01 |
| 發(fā)明（設計）人： | 鄒清成;朱開元;馬廣瑩;劉慧春;史小華 | 申請（專利權）人： | 浙江省蕭山棉麻研究所 |
| 主分類號： | C12N5/04 | 分類號： | C12N5/04;A01H4/00 |
| 代理公司： | 杭州求是專利事務所有限公司 33200 | 代理人： | 林松海 |
| 地址： | 311202 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 葉片 組織培養(yǎng) 快速 繁殖 培養(yǎng)基 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種礬根葉片的組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基及繁殖方法。通過外植體選擇、基本培養(yǎng)基的選擇和合適劑量的激素組合，實現(xiàn)了礬根組織培養(yǎng)中植株的高效再生，本發(fā)明操作簡單、污染率低、植株再生成功率高、成苗生產(chǎn)周期較短。
技術領域
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術領域，尤其涉及一種礬根的葉片組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基及繁殖方法。
背景技術
礬根(
礬根的常規(guī)繁殖方法是分株繁殖, 繁殖量有限, 且受季節(jié)影響，不能滿足市場需求。
關于礬根組織培養(yǎng)的報道較多，但存在以下問題：1）外植體選擇單一且局限，相關報道外植體都選擇“帶頂芽或腋芽的幼嫩莖段”（孫國鋒，2007；章志紅，2011；陳宏，2011；高燕，2015），還有報道“葉片不能誘導出芽”（ 王晶，2012）。外植體選擇帶頂芽或者腋芽的莖段，這種破壞性取樣不僅獲得外植體數(shù)量較少，而且導致母體整個植株被破壞，造成材料浪費；2）相關文獻基本培養(yǎng)基均選用MS，激素選用6-BA和NAA的不同配比，叢生芽的誘導率較低且容易出現(xiàn)玻璃化，增殖生長的增值倍數(shù)一般為8—9，生產(chǎn)周期較長。
發(fā)明內(nèi)容
針對存在的問題，本發(fā)明提供一種礬根的組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基及繁殖方法，通過外植體、基本培養(yǎng)基的選擇和合適劑量的激素組合，實現(xiàn)了礬根組織培養(yǎng)中植株的高效再生。該方法操作簡單、污染率低、植株再生成功率高，種苗生產(chǎn)周期較短。
一種礬根的組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基，它包括
1）芽誘導培養(yǎng)基：LS + 6-BA 1.0~3.0 mg /L+ NAA 0.1~0.3mg/L+
2）增殖培養(yǎng)基：LS + 6-BA 1.0~3.0 mg /L+ NAA 0.1~0.3mg/L；
3）生根培養(yǎng)基：1/2LS+ NAA0.5~1.5mg/L；
在LS以及1/2LS中，添加蔗糖20～30g/L，瓊脂5～8 g/L，調(diào)節(jié)pH5.6～5.8。
一種礬根葉片的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟:
（一）培養(yǎng)基的配制
1）芽誘導培養(yǎng)基：LS + 6-BA 1.0~3.0 mg /L+ NAA 0.1~0.3mg/L；
2）增殖培養(yǎng)基：LS + 6-BA0.5~1.0 mg /L+ NAA 0.05~0.1mg/L；
3）生根培養(yǎng)基：1/2LS+ NAA0.5~1.5mg/L；
在LS以及1/2LS中，添加蔗糖20～30g/L，瓊脂5～8 g/L，調(diào)節(jié)pH5.6～5.8。
(二) 礬根組培苗的培養(yǎng)
1）外植體的選擇：選擇生長健壯無病斑的礬根1-2年生葉片作為組織培養(yǎng)的外植體，流水沖洗1~2h，然后超凈工作臺上用無菌水沖洗干凈，用70%酒精消毒20-40s，，0.1%升汞溶液浸泡進行滅菌6-8min，然后用無菌水沖洗多次，備用；
2）叢生芽的誘導培養(yǎng)：在超凈工作臺上將步驟1）中準備的外植體切成1平方厘米的小塊，接種到芽誘導培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)；培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度為25±2℃，光照光強為1500Lx，光照時間12h/d；
3) 將步驟2）中的誘導生成的叢生芽接種到增殖培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)長出小苗； 培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度為25±2℃，光照光強為1500Lx，光照時間12h/d；
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