[發明專利]利用刺糖多孢菌發酵生產乙基多殺菌素的培養基和培養方法

在審

• 申請號: 201710118917.5
• 申請日: 2017-03-02
• 公開（公告）號: CN106701866A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 任勇
• 申請（專利權）人: 寧夏泰瑞制藥股份有限公司
• 主分類號: C12P19/62
• 分類號: C12P19/62;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用刺糖多孢菌發酵生產乙基多殺菌素的培養基，其特征在于包括一級種子培養基、二級種子培養基和發酵培養基，其中

所述一級種子培養基的組成為：

淀粉糖蜜5～9g/L、麩皮8～12g/L、橄欖油2～6g/L、魚粉3～7g/L、玉米漿干粉11～15g/L、中性大豆蛋白胨4～8g/L、輕質碳酸鈣1～5g/L；

所述二級種子培養基的組成為：

淀粉糖蜜7～11g/L、麩皮11～15g/L、橄欖油3～7g/L、魚粉5～9g/L、玉米漿干粉12～16g/L、中性大豆蛋白胨5～9g/L、縮二脲0.2～0.6g/L、輕質碳酸鈣2～6g/L、磷酸二氫鉀0.03～0.07g/L；

所述發酵培養基的組成為：

淀粉糖蜜10～14g/L、麩皮13～17g/L、橄欖油4～8g/L、魚粉7～11g/L、玉米漿干粉14～18g/L、中性大豆蛋白胨7～11g/L、縮二脲0.3～0.7g/L、復合氨基酸粉0.4～0.8g/L、輕質碳酸鈣2～6g/L、磷酸二氫鉀0.03～0.07g/L、硫酸鎂0.03～0.07g/L、硫酸亞鐵0.002～0.006g/L、生物素0.004～0.008g/L、卵磷脂0.02～0.06g/L、乙基纖維素5～9g/L。

2.一種利用權利要求1所述培養基發酵生產乙基多殺菌素的培養方法，其特征在于其工藝步驟為：

1） 一級種子培養：首先將一級種子培養基滅菌并冷卻至20～25℃，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將已經培養好的刺糖多孢菌母瓶發酵液接入一級種子培養基中進行一級種子培養，至菌體濃度28～32%、培養時間50～54h時移種；

2）二級種子培養：首先將二級種子培養基滅菌并冷卻至20～25℃，并用無菌空氣保壓，將已經培養好的一級種子培養基移入二級種子培養基中進行二級種子培養，至菌體濃度35～39%、培養時間45～50h時移入發酵培養基；

3）發酵培養：先將發酵培養基滅菌，冷卻至20～25℃，并用無菌空氣保壓，然后將培養好的二級種子液移入發酵培養基進行發酵培養，至菌體濃度34～38%、發酵周期不超過170h，菌株產量＞3g/L時終止發酵。

3.按照權利要求2所述的培養方法，其特征在于

所述一級種子培養基滅菌后的質量要求為：氨基氮20～30mg/L、還原糖2～3g/100ml；

所述二級種子培養基滅菌后的質量要求為：氨基氮30～40mg/L、還原糖3～4g/100ml；

所述發酵培養基滅菌后的質量要求為：氨基氮40～60mg/L、還原糖4～6g/100ml。

4.按照權利要求2所述的培養方法，其特征在于所述培養好的刺糖多孢菌母瓶發酵液質量要求為：菌體濃度20～30%；鏡檢無雜菌。

5.按照權利要求2所述的培養方法，其特征在于所述一級種子培養條件為：罐壓0.03～0.06MPa；罐溫29～30℃；空氣流量：30～50m³/h；攪拌轉速60～80r/min。

6.按照權利要求2所述的培養方法，其特征在于所述二級級種子培養條件為：罐壓0.03～0.06MPa；罐溫29～30℃；空氣流量：150～200m³/h；攪拌轉速80～100r/min。

7.按照權利要求2所述的培養方法，其特征在于所述發酵培養條件為：

a 培養基初始pH：發酵培養基滅菌后pH控制在7～7.5，

b 溫度：培養溫度29～30℃，

c 攪拌轉速：轉速控制在100～120r/min，

d 壓力控制：罐壓0.05～0.06MPa，

e pH控制：發酵過程中pH控制在6～7，

f 溶氧控制：

發酵前90h內，不控制溶氧，

91～140h，溶氧控制在40%以上，

141～發酵結束：溶氧控制在30%以上。

8.按照權利要求2所述的培養方法，其特征在于所述發酵過程中采用流加法進行補料，補料包括補水、補全料和pH控制，其中

a 補水工藝控制：

發酵前80h不用進行補水，

發酵81h～發酵結束，當菌體濃度高于38%時，加入滅菌水，控制發酵液菌體濃度在34～38%，每隔6～8h檢測發酵液菌體濃度；

b 補料

采用流加法補全料，發酵周期81h開始補料，補料量為發酵培養基總量的8-10%，發酵周期到160h后，停止補料；

c 發酵過程pH控制：

發酵前80h，pH不進行控制，

發酵81h～160h時，當pH＜6.0，采用流加法加入10～20%的氫氧化鈉，調節pH至6～7，當pH＞7，采用流加法加入30%的鹽酸溶液，調節pH至6～7。