[發明專利]防治牙周炎的DNA疫苗及其制備方法

在審

• 申請號: 201710118586.5
• 申請日: 2017-03-01
• 公開（公告）號: CN108524924A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 白國輝;田源;管曉燕;喻正文;劉建國;王倩;陳彬;吳明松;王方遠
• 申請（專利權）人: 遵義醫學院
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61P1/02;C12N15/85
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 黃書凱

1.一種DNA疫苗，為pVAX1-HA2-fimA重組質粒，是由牙齦卟啉單胞菌W83型的牙齦素-血凝素基因編碼區的核心功能區HA2基因和菌毛蛋白基因fimA基因經IRES基因序列連接后，插入真核表達載體pVAX1質粒得到。

2.根據權利要求1所述的DNA疫苗，其特征在于，所述的pVAX1-HA2-fimA重組質粒，經酶切去除pVAX1質粒后，得到的HA2-fimA的DNA序列如SEQ ID:2所示。

3.根據權利要求1或2所述的DNA疫苗的制備方法，包括如下步驟：

(1)、牙齦素-血凝素基因編碼區的核心功能區HA2和菌毛蛋白基因fimA基因及IRES序列的克隆；

(2)、pVAX1-HA2-fimA重組質粒的構建并轉化感受態細胞，篩選重組質粒；

(3)、重組質粒酶切后進行DNA測序鑒定，得到的HA2-fimA的DNA序列如SEQ ID:2所示。

4.根據權利要求3所述的DNA疫苗的制備方法，其特征在于；包括如下步驟：

(1)、牙齦素-血凝素基因編碼區的核心功能區HA2、菌毛蛋白基因fimA基因及IRES基因的克隆，HA2和fimA基因通過IRES基因序列連接后得到HA2-fimA重組基因片段；

(2)、將步驟(1)中獲得的HA2-fimA重組基因片段插入到pVAX1質粒，構建pVAX1-HA2-fimA重組質粒，并轉化感受態細胞DH5α，得到的pVAX1-HA2-fimA重組質粒；

(3)、步驟(2)得到的pVAX1-HA2-fimA重組質粒，經酶切鑒定正確后進行DNA測序，得到的HA2-fimA的DNA序列如SEQ ID:2所示。

5.根據權利要求3或4所述的DNA疫苗的制備方法，其特征在于；

所述步驟(1)的具體操作為：

1)、根據Genbank公布的HA2、fimA以及pIRE2-EGFP的圖譜中的IRES序列設計引物，并進行引物合成；

2)、牙齦卟啉單胞菌W83型的培養及基因組DNA的提取；

3)、pVAX1及pIRES2-EGFP質粒的提取；

4)、牙齦素-血凝素基因編碼區的核心功能區HA2、菌毛蛋白基因fimA基因及IRES基因的克隆，HA2和fimA基因通過IRES基因序列連接后得到HA2-fimA重組基因片段，HA2-fimA重組基因的PCR擴增。

6.根據權利要求3或4所述的DNA疫苗的制備方法，其特征在于；

所述步驟(2)的具體操作為：將步驟(1)中獲得的HA2-fimA重組基因片段插入到pVAX1質粒中，構建pVAX1-HA2-fimA重組質粒，將上述重組質粒轉化感受態細胞DH5α，重組質粒酶切鑒定正確后送DNA測序，序列如SEQ ID:2所示；為HA2-fimA重組基因片段。

7.根據權利要求1或2所述的DNA疫苗在制備防治牙周炎的藥物或者疫苗中的用途。

8.一種藥物或疫苗，包含根據權利要求1或2所述的DNA疫苗以及藥學可接受載體。