[發明專利]用于蘇木精-伊紅染色的方法和成分

有效

• 申請號: 201710117348.2
• 申請日: 2013-01-25
• 公開（公告）號: CN106872715B
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發明（設計）人: 斯坦利·E·漢森;羅素·邁爾斯;羅納德·保羅;奧德拉·拉斯馬森;凱特·泰勒
• 申請（專利權）人: 萊卡生物系統里士滿股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京思益華倫專利代理事務所(普通合伙) 11418
• 代理人: 彭臻臻;趙飛

本發明提供當用于染色方案(protocol)、諸如蘇木精?伊紅染色方案的某些點時有益于染色方案的特定成分的溶液。這些特定溶液的配方(fromulation)使得該溶液的帶出不產生不利影響，或優選地穩定或有利地改性與該溶液進行接觸的染色試劑溶液。在本發明的某些實施例中，溶液進行緩沖，以保持特定pH，使得當諸如帶入到蘇木精中的帶出將不顯著影響下一染色試劑的pH。

相關交叉申請

本發明主張2012年1月26日申請的美國臨時專利申請No.61/591,181的優先權，其全文通過引用而包含于此。

背景技術

蘇木精-伊紅(“HE”)染色技術是組織樣本病理學可視化的最常用的組織學技術。一般的HE染色系統由包括鋁基蘇木精(aluminum based hematoxylin)、伊紅、分化液以及上藍劑的溶液構成。蘇木精是天然染料，當與鋁離子絡合時生成正電荷分子，該正電荷分結合到脫氧核糖核酸上，以引起細胞核紫色著色。分化液通常是弱酸性溶液，其通過從組織和載玻片中去除過量的背景染色來銳化染色載玻片的對比度。上藍劑是一種pH呈堿性的溶液，該溶液被施加到染色樣本時修飾結合的蘇木精的結構，以引起鮮艷的藍色/紫色著色。伊紅是負電荷染料，其結合到細胞質和結締組織中的正電荷蛋白質，以引起與細胞核的藍色/或紫色著色截然不同的粉紅色/橙色著色。

HE染色通常以“批量”方式進行，其中自動染色機通常包含一系列染色試劑容器并使用將載玻片/擱物架(rack)從一個容器連續移動到另一個的機械臂。通常，擱物架或保持器能夠運載20-30個載玻片，但是，一些染色器械包含擱物架，每個擱物架保持更少或更多數量的載玻片，并且在至少一個染色機情況下，多個擱物架可以同時放置在染色器皿上。控制自動染色機的軟件允許操作者對每個步驟的持續時間以及步驟的次序編程。雖然染色的批量方式是簡單、經濟并且相對快速，但是該技術具有一些缺點。

將載有載玻片的擱物架從一個容器運載到下一個容器的移動導致染色試劑或水的帶出(carry-over)。由于染色試劑或水附著到載玻片、樣品、載玻片擱物架等上，發生帶出。因為帶出可能以幾種方式影響下游染色試劑的功能，所以不希望發生帶出。帶出會稀釋溶液內的染料或功能試劑的濃度。帶出和稀釋液能通過改變溶劑的特性并且由此影響溶劑的諸如pH和離子強度的參數而影響染色試劑的功能。最后，帶出可能將污染物引入到染色試劑中。通過這些機器操作時，帶出對染色系統的性能、功能、穩定性、可預見性以及能力(capacity)產生不利影響。雖然一次帶出可能導致這樣的不利影響，但是，在多重染色試驗(multiple staining runs)過程中，帶出的不利影響尤其成為問題，因為不利影響由于重復的帶出的累計影響而增強或放大。

由于帶出的不利影響，當前染色系統中的試劑的能力或使用壽命非常不可預測的。經常在基于過去的經驗而預定的使用量后改變試劑，或一旦試劑開始出現失效征兆或到達失效點時就更換試劑。因此，當前系統的溶液經常以不同速率、即以不同時間間隔改變。這增加了復雜性和低效率，因為染色頻繁地停止，以改變一種或少于所有種類的溶液。另一方面，如果一次改變所有溶液，則由于拋棄一些仍然還具有可用的能力來處理額外的載玻片的溶液，因此浪費金錢。

一般嘗試解決帶出的不利結果已經涉及到頻繁地定期或乃至于為每個試樣使用新的溶液更換染色試劑。例如，如美國專利申請No.7,468,161和8,048,373中所述。另外，已經對個別化學試劑(蘇木精、伊紅、分化劑(differentiator)和上藍緩沖劑(bluingbuffer))進行了改進，這可以延遲一些帶出的影響。在至少一個例子中，已經嘗試消除由于儀器(Dako CoverStainer)的機械設計而引起的帶出影響。但是，由于帶出導致的染色效果的不可預測性和減小仍然是主要的有待解決的問題。

發明內容