[發明專利]鴨坦布蘇病毒卵黃抗體中病毒的滅活工藝

在審

• 申請號: 201710117314.3
• 申請日: 2017-03-01
• 公開（公告）號: CN106963956A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 魏平華;王小慶
• 申請（專利權）人: 廣州格雷特生物科技有限公司
• 主分類號: A61L2/08
• 分類號: A61L2/08;A61L2/18;C07K16/10;C12N7/06;C12N7/04;C12N13/00;C12R1/93;A61L101/34
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司44205
• 代理人: 胡輝

技術領域

本發明屬于生物制藥中抗體治療劑領域，具體涉及鴨坦布蘇病毒卵黃抗體中病毒的滅活工藝。

背景技術

雞卵黃抗體(EggYolkIm-munoglobulin)是存在于卵黃中的免疫球蛋白，它是由母雞血清中的免疫球蛋白轉移而來。卵黃抗體可以應用于臨床疾病的治療，如雞傳染性法氏囊病、新城疫、鴨瘟、小鵝瘟、豬瘟等等。在臨床實踐中，卵黃抗體的預防和治療效果非常理想，同時卵黃抗體的制造工藝簡單價廉，幾年前在養禽業生產中用量很大，發揮過十分重要的作用。

但是，沒有經過病原微生物滅活的抗體類治療劑存在十分明顯的問題。其原因在于制備抗體采用的禽極易攜帶垂直傳播性病原，如大腸桿菌、沙門氏菌、減蛋綜合征病毒、禽流感病毒等；另外，由于一些企業生產條件簡單，生產過程中容易混雜入一些外源性病毒。鑒于這些情況，脫脂卵黃抗體必須進行禽源、外源性病原微生物的滅活處理，防止使用卵黃抗體后造成傳播病原的擴散甚至疾病的爆發。

β-丙內酯(BPL)是一種雜環化合物，對病毒具有很強的滅活作用，比福爾馬林作用強25倍，但對病毒抗原影響或破壞作用較小。其作用機制通過與嘌呤堿基(主要是鳥嘌呤)反應改變病毒核酸結構達到滅活病毒的目的，蛋白不發生反應，不影響抗體的效價。

β-丙內酯雖是一種致癌物，但極易水解，37℃2小時可以完全水解，水解后形成人體脂肪代謝產物β-羥基丙酸，對人體無害，在國外已廣泛用于各種疫苗的滅活。將BPL用于卵黃抗體外源型病毒滅活，具有安全的和不影響抗體效價等優點。

但是滅活劑β-丙內酯成本較高，在國內的實際生產中應用較少，多數使用甲醛滅活。有研究報道，BPL的濃度和反應時間與滅活效果存在一定關系。所以優選出BPL的最佳滅活條件，在合理節約的條件下，獲得良好的滅活效果是關鍵。

此外，由于獸用高免卵黃液價格低廉和針對地方變異病原株的特殊性要求，在我國現有條件下，絕大多數生產廠家只能使用非SPF蛋。所以除了病毒以外，高免卵黃液中還容易攜帶垂直傳播性的細菌性病原，比如沙門氏菌、大腸桿菌等。此外，在制備的過程中也可能帶來一些細菌的污染。

⁶⁰Coγ射線具有較強的穿透力，在生物體中能均勻地產生作用，主要是通過作用于病毒核酸(DNA、RNA)而造成病毒失活，可以完全殺滅高免卵黃液中的大腸桿菌、沙門氏菌和霉形體，且不影響卵黃抗體的效價和理想性質。

⁶⁰Coγ射線對微生物有較強的殺滅作用，不同類型的病毒對⁶⁰Coγ射線的敏感性是有較大差別的。控制輻射的劑量和劑量率，在滅活微生物的同時不影響卵黃抗體的效價和理化性質是關鍵。

本發明采用BPL聯合使用⁶⁰Coγ射線滅活鴨坦布蘇病毒中的外源病毒，來獲得更安全、有效、穩定的產品。

發明內容

本發明的目的在于提供一種鴨坦布蘇病毒卵黃抗體中病毒的滅活工藝。

本發明所采取的技術方案是：

鴨坦布蘇病毒卵黃抗體中病毒的滅活工藝，是利用β-丙內酯加入到脫脂卵黃抗體中，混合作用，再以⁶⁰Coγ射線進行照射，滅活卵黃中的病毒。

優選的，脫脂卵黃抗體的制備方法為：按照卵黃與酸化水為1：(4-8)的體積比加入酸化水并降溫至2-8℃，攪拌均勻，2-8℃靜置4-6小時，酸化完成后，加入終濃度為0.2％正辛酸，攪拌并在室溫放置3-5小時，分離上清液，取上清液即為脫脂卵黃抗體。

優選的，脫脂卵黃抗體的制備方法為：按照卵黃與酸化水為1：6的體積比加入酸化水并降溫至2-8℃，攪拌均勻，2-8℃靜置5小時，酸化完成后，加入終濃度為0.2％正辛酸，攪拌并在室溫放置3-5小時，分離上清液，取上清液即為脫脂卵黃抗體。

優選的，.酸化水為純化水利用鹽酸調節pH為4.0-5.0得到的。

優選的，酸化水為純化水利用鹽酸調節pH為4.5得到的。

優選的，加入終濃度為0.02％-0.06％的β-丙內酯，與脫脂卵黃抗體混合后，在4℃反應24-36小時。

優選的，利用37℃反應2小時終止β-丙內酯的滅活后，再以⁶⁰Coγ射線進行照射。

優選的，⁶⁰Coγ射線所用的劑量為2.5-6.5kGy，劑量率為12-15Gy/min。