[發(fā)明專利]一種用于檢測人Brca易感基因的探針、引物及試劑盒

在審

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• 申請日: 2017-03-01
• 公開（公告）號: CN107058510A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設計）人: 羅益華;陳晴;吳春曉
• 申請（專利權(quán)）人: 上海閃錦生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及分子生物學技術領域，具體涉及一種用于檢測人BRCA易感基因SNP的探針、引物及試劑盒。

背景技術

女性乳腺是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的，乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤。乳腺癌中99%發(fā)生在女性，男性僅占1%。

乳腺并不是維持人體生命活動的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性，細胞之間連接松散，容易脫落。癌細胞一旦脫落，游離的癌細胞可以隨血液或淋巴液播散全身，形成轉(zhuǎn)移，危及生命。目前乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。

全球乳腺癌發(fā)病率自20世紀70年代末開始一直呈上升趨勢。美國8名婦女一生中就會有1人患乳腺癌。中國不是乳腺癌的高發(fā)國家，但不宜樂觀，近年我國乳腺癌發(fā)病率的增長速度卻高出高發(fā)國家1～2個百分點。據(jù)國家癌癥中心和衛(wèi)生部疾病預防控制局2012年公布的2009年乳腺癌發(fā)病數(shù)據(jù)顯示：全國腫瘤登記地區(qū)乳腺癌發(fā)病率位居女性惡性腫瘤的第1位，女性乳腺癌發(fā)病率（粗率）全國合計為42.55/10萬，城市為51.91/10萬，農(nóng)村為23.12/10萬。

乳腺癌已成為當前社會的重大公共衛(wèi)生問題。自20世紀90年代全球乳腺癌死亡率呈現(xiàn)出下降趨勢；究其原因，一是乳腺癌篩查工作的開展，使早期病例的比例增加；二是乳腺癌綜合治療的開展，提高了療效。乳腺癌已成為療效最佳的實體腫瘤之一。

乳腺癌的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷，是提高療效的關鍵。應結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)及病史、體格檢查、影像學檢查、組織病理學和細胞病理學檢查（在有條件的醫(yī)院），進行乳腺癌的診斷與鑒別診斷。

2009年6月30號，衛(wèi)生部、全國婦聯(lián)關于印發(fā)《農(nóng)村婦女“兩癌”檢查項目管理方案》的通知。1990年，研究者發(fā)現(xiàn)了一種直接與遺傳性乳腺癌有關的基因，命名為乳腺癌1號基因，英文簡稱BRCA1。1994年，又發(fā)現(xiàn)另外一種與乳腺癌有關的基因，稱為BRCA2。1990年，抑制基因，它位于人體細胞核的第17號染色體上。1994年，研究者們在第13號染色體上又發(fā)現(xiàn)另外一種與乳腺癌有關的基因，稱為BRCA2。在此之后,很多情況下人們把兩種基因統(tǒng)稱BRCA1/2一起討論。實際上，BRCA 1/2是兩種具有抑制惡性腫瘤發(fā)生的優(yōu)良基因（稱為“抑癌基因”），損傷修復、細胞的正常生長方面有重要作用。如果BRCA1/2基因的結(jié)構(gòu)發(fā)生了某些改變（稱為“突變”），那么它所具有的抑制腫瘤發(fā)生的功能就會受影響。已發(fā)現(xiàn)的BRCA1/2的突變有數(shù)百種之多，除了與遺傳性乳腺癌和卵巢癌有關。有人總結(jié)了BRCA1和BRCA2基因突變相關的癌癥的終身風險，顯示有BRCA1基因突變者，患乳腺癌和卵巢癌的風險分別是50%-85%和15%-45%，有BRCA2基因突變者，患乳腺癌和卵巢癌的風險分別是50%-85%和10%-20%。與普通婦女相比，的確是很高的患癌幾率。兩種基因的突變屬于“常染色體顯性遺傳”（也就是說不是某一性別特有），但并不是所有突變攜帶者都會發(fā)展成癌癥，只是攜帶有這種突變的人有很高的癌癥易感性。美國的一份資料顯示，在3億多美國人中約250,000-500,000名攜帶有該突變，在德系猶太人, 冰島人，法裔加拿大人中比例高，而亞裔中比例較低。這也是為什么北歐、美國等國家乳腺癌的發(fā)生率高于亞洲國家的原因。

BRCA1基因定位于17q21，約81kb, 內(nèi)含高達41.5%的Alu重復序列和4.8%的其它重復序列。含有23個外顯子。BRCA1編碼蛋白的N末端序列含有一環(huán)狀結(jié)構(gòu)域(ringdomain)，能夠與BRCA1相關環(huán)狀蛋白(BRCA12 associated RING domain protein,BARD1)組成環(huán)2環(huán)異二聚體。

如果BRCA1/2基因的結(jié)構(gòu)發(fā)生了某些改變，那么它所具有的抑制腫瘤發(fā)生的功能就會受影響。2013年已發(fā)現(xiàn)的BRCA1/2的突變有數(shù)百種之多。有人總結(jié)了BRCA1和BRCA2基因突變相關的癌癥的終身風險，顯示有BRCA1基因突變者，患乳腺癌和卵巢癌的風險分別是50%～85%和15%～45%，有BRCA2基因突變者，患乳腺癌和卵巢癌的風險分別是50%～85%和10%～20%。研究表明，Brca的始祖突變(185delAG 、5382insC、6174delT)即rs386833395位點、rs397507246位點、rs80359550位點，會導致乳腺癌患病風險大幅提高。