[發明專利]一種子宮內膜干細胞增殖方法及其應用

在審

• 申請號: 201710114766.6
• 申請日: 2017-02-28
• 公開（公告）號: CN106947734A
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發明（設計）人: 汪娟
• 申請（專利權）人: 蘭赫（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074;A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種子宮內膜干細胞增殖方法，其特征在于，所述方法包括步驟：

(1)細胞預處理

將子宮內膜干細胞與凍存液混合，調整細胞懸液的細胞濃度后，將細胞懸液在2-10℃放置6-8h；

(2)凍存

將步驟(1)預處理過的子宮內膜干細胞細胞懸液在-20℃放置30-40分鐘，接著在-70℃放置10-18個小時，然后轉入液氮中凍存；

(3)復蘇

將液氮中凍存的子宮內膜干細胞取出，加入37℃預熱的復蘇液進行復蘇。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中細胞濃度為3×10⁶-7×10⁶個/ml；優選地，所述步驟(1)中細胞濃度為5×10⁶個/ml。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中將細胞懸液在4℃放置7h。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述凍存液為在DMEM培養液中含有：

維生素C，15-20mg/ml；

維生素E，0.1-0.3mg/ml；

亞硫酸氫鈉，2-6mg/ml；

Nisin素，3-9mg/ml；

BSA，0.05-0.08g/ml；

DMSO，終濃度5-7％(v/v)。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述凍存液為在DMEM培養液中含有：

維生素C，18mg/ml；

維生素E，0.2mg/ml；

亞硫酸氫鈉，4mg/ml；

Nisin素，6mg/ml；

BSA，0.08g/ml；

DMSO，終濃度6％(v/v)。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述復蘇液為在DMEM培養液中含亞硫酸氫鈉2-6mg/ml。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述復蘇液為在DMEM培養液中含亞硫酸氫鈉4mg/ml。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括步驟：

(4)傳代

對步驟(3)復蘇的子宮內膜干細胞進行傳代擴增培養。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，將凍存的子宮內膜干細胞自液氮中取出后，在40℃水浴鍋溫育2-3分鐘；加入10倍體積的37℃預熱的復蘇液重懸洗滌，離心去上清；重復洗滌步驟一次，即得復蘇的子宮內膜干細胞。