[發明專利]一種子宮內膜干細胞規模化制備方法及其應用在審
| 申請號： | 201710114695.X | 申請日： | 2017-02-28 |
| 公開（公告）號： | CN106801034A | 公開（公告）日： | 2017-06-06 |
| 發明（設計）人： | 汪娟 | 申請（專利權）人： | 蘭赫（上海）生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/074 | 分類號： | C12N5/074 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 201100 上海市閔行區*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 子宮 內膜 干細胞 規模化 制備 方法 及其 應用 | ||
1.一種子宮內膜干細胞規模化制備方法，其特征在于，所述方法包括步驟：
1)預處理
在無菌條件下，對獲得的子宮內膜組織材料，進行剪碎處理放入冰浴DMEM/F12培養基中；
2)消化
加入約1-4倍體積的消化液，消化液中含膠原酶I(優選為5-15U/ml)和膠原酶IV(優選為100-200U/ml)，37℃消化30-90min，獲得單細胞懸液；將消化好的單細胞懸液移入離心管，靜置幾分鐘去除剩余的大塊組織；離心后，基質細胞和上皮細胞存于上清液中；
3)原代培養
將步驟2)分離的細胞懸液接種于培養瓶中，培養基為DMEM/F12培養基，含5-20％(v/v)胎牛血清、1％(w/v)青/鏈霉素，37℃、5％C02培養箱孵育，即獲得所述子宮內膜干細胞。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)中，將子宮內膜組織材料剪碎至0.5-2mm3。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中，加入約2-3倍體積的消化液。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中，所述消化液中還包括IL-6或其衍生多肽。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述IL-6的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述消化液中還包括IL-6衍生多肽，所述IL-6的衍生多肽具有如下的氨基酸序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中，37℃消化50-60min。
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中，離心條件為1000-1800rpm離心2-5min。
9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中，離心條件為1500rpm離心3min。
10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中，加入約2-3倍體積的消化液。
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