[發明專利]一種檢測CYP2C19基因SNP位點rs4244285基因型的試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201710114091.5
• 申請日: 2017-02-28
• 公開（公告）號: CN106906284A
• 公開（公告）日: 2017-06-30
• 發明（設計）人: 車團結;同重湘;尤崇革;謝小冬;李琳;李亞鵬
• 申請（專利權）人: 蘇州百源基因技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙)44288
• 代理人: 胡擁軍,趙賽

1.一種檢測CYP2C19基因SNP位點rs4244285基因型的試劑盒：其特征在于包括：標準品、引物、含有熒光染料的qPCR擴增試劑；所述標準品為包含CYP2C19 rs4244285(c.681G>A)位點的野生型DNA序列和包含CYP2C19 rs4244285(c.681G>A)位點的純合突變型DNA序列；所述引物用于擴增標準品和待檢測樣品。

2.根據權利要求1所述的檢測CYP2C19基因SNP位點rs4244285基因型的試劑盒，其特征在于：所述野生型DNA序列為序列W；所述純合突變型DNA序列為序列M。

3.根據權利要求2所述的檢測CYP2C19基因SNP位點rs4244285基因型的試劑盒，其特征在于：所述標準品為連接有序列W的質粒和連接有序列M的質粒。

4.根據權利要求2所述的檢測CYP2C19基因SNP位點rs4244285基因型的試劑盒，其特征在于：所述引物為CYP2C19-F和CYP2C19-R。

5.根據權利要求1所述的檢測CYP2C19基因SNP位點rs4244285基因型的試劑盒，其特征在于：所述含有熒光染料的qPCR擴增試劑為生工生物工程(上海)股份有限公司所產的含EvaGreen的Green-2-Go qPCR Mastermix試劑盒。

6.一種如權利要求1所述的檢測CYP2C19基因SNP位點rs4244285基因型的試劑盒的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

1)引物設計與合成

根據CYP2C19 rs4244285基因序列，應用Primer express 3軟件、Primer Premier 5軟件以及Oligo 7軟件，設計一組引物；

2)制備標準品

A、合成含有CYP2C19rs4244285(c.681G>A)位點的野生型DNA序列和純合突變型DNA序列；

B、將野生型DNA序列和純合突變型DNA序列分別與質粒連接；將連接后的質粒導入細菌中；培養細菌并且獲得陽性克隆；

C、擴大培養步驟B所獲得的陽性克隆，提取質粒得到標準品；

3)選購或配制含有熒光染料的qPCR擴增試劑。

7.根據權利要求6所述的檢測CYP2C19基因SNP位點rs4244285基因型的試劑盒的制備方法，其特征在于步驟B中所述的質粒為pMD18-T質粒。

8.根據權利要求7所述的檢測CYP2C19基因SNP位點rs4244285基因型的試劑盒的制備方法，其特征在于：所述野生型DNA序列為序列W；所述純合突變型DNA序列為序列M。

9.根據權利要求8所述的檢測CYP2C19基因SNP位點rs4244285基因型的試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟B中將序列W或序列M分別與pMD18-T質粒連接，所采用的連接體系為：

連接的反應時間為10-16h，反應溫度為16℃。

10.根據權利要求6所述的檢測CYP2C19基因SNP位點rs4244285基因型的試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟C的具體操作為將陽性克隆接種于含有氨芐抗性的LB液體培養基中，溫度為37℃攪拌速度為220rpm培養14-16h；再從菌體中提取質粒獲得標準品。