[發明專利]一種細胞毒性低、轉染效率高的非病毒基因轉染載體材料及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201710113970.6
• 申請日: 2017-02-28
• 公開（公告）號: CN106866960B
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 黃玉剛;易玲
• 申請（專利權）人: 廣州醫科大學
• 主分類號: C08G69/48
• 分類號: C08G69/48;C08G69/42;C12N15/87
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 楊燕瑞;黃磊

1.一種細胞毒性低、轉染效率高的非病毒基因轉染載體材料，其特征在于其結構如通式(1)所示：

其中，R₁為芐基、烷基或聚乙二醇，n為聚合度，x為側鏈不含雙鍵的重復單元的聚合度，且x<n。

2.一種權利要求1所述的細胞毒性低、轉染效率高的非病毒基因轉染載體材料的制備方法，其特征在于包括四步合成反應：(1)L-半胱氨酸與溴丙炔的親核取代反應制備S-炔丙基-L-半胱氨酸；(2)制備S-炔丙基-L-半胱氨酸-N-羧基環內酸酐單體；(3)引發S-炔丙基-L-半胱氨酸-N-羧基環內酸酐單體開環聚合，得到聚(S-炔丙基-L-半胱氨酸)；(4)通過光化學點擊技術將聚(S-炔丙基-L-半胱氨酸)側鏈改性，制備水溶性的陽離子多肽。

3.根據權利要求2所述的細胞毒性低、轉染效率高的非病毒基因轉染載體材料的制備方法，其特征在于具體包括以下四個步驟：

(1)L-半胱氨酸與溴丙炔發生取代反應，生成側鏈含有C≡C鍵的S-炔丙基-L-半胱氨酸；

(2)步驟(1)得到的S-炔丙基-L-半胱氨酸和三光氣在乙酸乙酯中發生閉環反應，生成S-炔丙基-L-半胱氨酸-N-羧基環內酸酐；

(3)利用端基為伯氨基的引發劑引發步驟(2)的S-炔丙基-L-半胱氨酸-N-羧基環內酸酐單體開環聚合，得到側鏈含C≡C鍵的多肽聚(S-炔丙基-L-半胱氨酸)；

(4)利用“巰基-炔”光化學點擊技術，將半胱胺鹽酸鹽接枝到步驟(3)的多肽聚(S-炔丙基-L-半胱氨酸)的側鏈，得到陽離子多肽。

4.根據權利要求3所述的細胞毒性低、轉染效率高的非病毒基因轉染載體材料的制備方法，其特征在于：步驟(1)中溴丙炔與L-半胱氨酸的摩爾比為1:1.1～1:2.0；所述反應時間為2～3h。

5.根據權利要求3所述的細胞毒性低、轉染效率高的非病毒基因轉染載體材料的制備方法，其特征在于：步驟(1)具體為向溶有L-半胱氨酸的氨水溶液中滴加溴丙炔進行反應；氨水的濃度為3.0～4.0M。

6.根據權利要求3所述的細胞毒性低、轉染效率高的非病毒基因轉染載體材料的制備方法，其特征在于：步驟(2)中所述S-炔丙基-L-半胱氨酸和三光氣的反應摩爾比例為3:1；所述反應溫度控制在80～90℃；反應時間為3～6h。

7.根據權利要求3所述的細胞毒性低、轉染效率高的非病毒基因轉染載體材料的制備方法，其特征在于：步驟(3)中所述的引發劑為芐胺、丙胺、正丁胺、正戊胺、正己胺和端基為伯氨基的聚乙二醇中的至少一種；所述聚合溫度控制在0～25℃，聚合時間為36～72h。

8.根據權利要求3所述的細胞毒性低、轉染效率高的非病毒基因轉染載體材料的制備方法，其特征在于：步驟(4)中所述多肽側鏈的炔基和半胱胺鹽酸鹽的巰基的摩爾比為1:2～1:4。

9.根據權利要求3所述的細胞毒性低、轉染效率高的非病毒基因轉染載體材料的制備方法，其特征在于：步驟(4)具體為將步驟(3)中的多肽和半胱胺鹽酸鹽分別溶于二甲基亞砜中，混合后加入光引發劑安息香雙甲醚，在紫外光的照射下反應；紫外光的最大吸收波長為365nm，光強為4mW·cm^-2，功率為4W，光照時間為10～30min。

10.權利要求1所述的細胞毒性低、轉染效率高的非病毒基因轉染載體材料在siRNA遞送中的應用。