[發(fā)明專(zhuān)利]CTCF陷阱蛋白在制備抗葡萄膜黑色素瘤藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710113207.3
• 申請(qǐng)日: 2017-02-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106913861B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-02-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張赫;范先群;文旭洋;王茜;李芳;葛盛芳;賈仁兵
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): A61K38/17
• 分類(lèi)號(hào): A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

1.一種CTCF陷阱蛋白，其特征在于，所述的CTCF陷阱蛋白是一種人工表達(dá)的重組蛋白，它去除了野生型CTCF的N端和C端功能區(qū)，保留其鋅指結(jié)構(gòu)并添加DNA甲基化酶Sss1；

所述的CTCF陷阱蛋白的氨基酸序列為MVPKKKRKVEDKVGNMKPPKPTKIKKKGVKKTFQCELCSYTCPRRSNLDRHMKSHTDERPHKCHLCGRAFRTVTLLRNHLNTHTGTRPHKCPDCDMAFVTSGELVRHRRYKHTHEKPFKCSMCDYASVEVSKLKRHIRSHTGERPFQCSLCSYASRDTYKLKRHMRTHSGEKPYECYICHARFTQSGTMKMHILQKHTENVAKFHCPHCDTVIARKSDLGVHLRKQHSYIEQGKKCRYCDAVFHERYALIQHQKSHKNEKRFKCDQCDYACRQERHMIMHKRTHTGEKPYACSHCDKTFRQKQLLDMHFKRYHDPNFVPAAFVCSKCGKTFTRRNTMARHADNCAGPDGVEGENGFEGSGGGGSGGGGSGGGLGSTLEMSKVENKTKKLRVFEAFAGIGAQRKALEKVRKDEYEIVGLAEWYVPAIVMYQAIHNNFHTKLEYKSVSREEMIDYLENKTLSWNSKNPVSNGYWKRKKDDELKIIYNAIKLSEKEGNIFDIRDLYKRTLKNIDLLTYSFPCQDLSQQGIQKGMKRGSGTRSGLLWEIERALDSTEKNDLPKYLLMENVGALLHKKNEEELNQWKQKLESLGYQNSIEVLNAADFGSSQARRRVFMISTLNEFVELPKGDKKPKSIKKVLNKIVSEKDILNNLLKYNLTEFKKTKSNINKASLIGYSKFNSEGYVYDPEFTGPTLTASGANSRIKIKDGSNIRKMNSDETFLYIGFDSQDGKRVNEIEFLTENQKIFVCGNSISVEVLEAIIDKIGG。

2.如權(quán)利要求1所述的CTCF陷阱蛋白在制備抗葡萄膜黑色素瘤藥物中的應(yīng)用。

3.一種包含權(quán)利要求1所述的CTCF陷阱蛋白的慢病毒在制備抗葡萄膜黑色素瘤藥物中的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種包含CTCF陷阱蛋白的慢病毒在制備抗葡萄膜黑色素瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述包含CTCF陷阱蛋白的慢病毒的制備方法如下：293T細(xì)胞計(jì)數(shù)，取4-8*10⁶個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)入10cm培養(yǎng)皿，加入無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基至10ml；取轉(zhuǎn)染試劑Lipo200030μl與無(wú)血清DMEM 500μl混合，室溫靜置5min；另取500μl無(wú)血清DMEM，加入CTCF陷阱蛋白質(zhì)粒3μg，包裝質(zhì)粒PM 3μg，包裝質(zhì)粒PS 6μg，混勻；將上述兩管液體混合，室溫靜置20min；靜置后將液體加入上述10cm皿中，混勻后37℃，5％CO₂培養(yǎng)；5小時(shí)后換液，棄上清，加入含10％胎牛血清的DMEM 10ml，繼續(xù)37℃，5％CO₂培養(yǎng)；48小時(shí)收上清，加入含10％胎牛血清的DMEM 10ml，繼續(xù)37℃，5％CO₂培養(yǎng)；72小時(shí)再次收上清；取兩次收取的上清，4000rpm，4℃，離心20min；用5ml注射器將慢病毒用濾器過(guò)濾后加入透析管，3500rpm離心30min，分裝后-80度保存。