[發(fā)明專利]一種結(jié)核桿菌的檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710112474.9
• 申請(qǐng)日: 2017-02-28
• 公開（公告）號(hào): CN106755533A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔俊偉;張邊防;蔡瑞艷;高漸聯(lián);周愛杰;王永亮;劉傳寶;李振云;高景利;石卓林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 西安銘澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)61223
• 代理人: 潘宏偉

1.一種結(jié)核桿菌的檢測(cè)方法，其特征在于：該結(jié)核桿菌的檢測(cè)方法的具體步驟如下：

S1：提取患者晨痰，并將晨痰置于無菌密封瓶中加入處理液制作成痰液標(biāo)本，待檢；

S2：在痰液標(biāo)本中加入1mol/L的氫氧化鈉溶液處理3～5min，混勻后取0.5mol/L的標(biāo)本14000～16000r/min離心10min，去上清液留沉淀待檢；

S3：將步驟S2中的沉淀物與1～3ml的蒸餾水混勻后，再15000～17000r/min離心4～6min，置90～110℃沸水浴13～15min，取上清液3μL待檢；

S4：提取3μL步驟S3中的上清液，在上清液中加入反應(yīng)液15～25μL和Taq酶1μL，混勻后稍加離心，并在其表面滴2～5滴消毒液，置94℃預(yù)變性2～4min，再按94℃40s，64℃60s擴(kuò)增35個(gè)循環(huán)；

S5：擴(kuò)增結(jié)束后，在反應(yīng)管中加入4～6μL溴酚藍(lán)終止反應(yīng)，取15μL反應(yīng)液，經(jīng)電泳處理后在紫外燈下觀察結(jié)果，若240bp處出現(xiàn)橙黃色條帶，則該結(jié)核桿菌為陽性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核桿菌的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟S1中，處理液為胰酶消化液和氫氧化鈉溶液的混合液，其中胰酶消化液：氫氧化鈉溶液＝1:1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核桿菌的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟S1中，無菌密封瓶中加入處理液后，在37～39℃下水浴消化，直至痰液完全消化為止。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核桿菌的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟S3中，在離心過程中加入20～40μL的裂解液并攪拌均勻。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核桿菌的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟S4中，離心轉(zhuǎn)速為12000～14000r/min，直到其完全混勻?yàn)橹埂?/p>

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核桿菌的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟S5中，采用2％的瓊脂糖凝膠電泳，電泳時(shí)間為25～35min。