[發明專利]二次諧波成像結合熒光成像在定位物質透皮吸收中的應用

有效

• 申請號: 201710110964.5
• 申請日: 2017-02-28
• 公開（公告）號: CN106841145B
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發明（設計）人: 王毅;孫婭楠;趙靜
• 申請（專利權）人: 中國中醫科學院醫學實驗中心
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;張立娜

1.一種檢測待測物質透皮吸收情況的方法，其特征在于：所述方法中，以皮膚真皮層中膠原所產生的SHG信號作為皮膚組織的結構內參，觀察被熒光標記的待測物質經皮吸收的過程和/或在皮膚組織中的聚集部位；

所述方法包括如下步驟：

(1)將所述待測物質進行熒光標記；

(2)將經步驟(1)熒光標記后的所述待測物質涂抹于皮膚外表面，然后從涂抹了所述待測物質的皮膚組織中采集SHG信號和熒光信號；

(3)通過觀察步驟(2)所采集的SHG信號和熒光信號的位置關系和/或變化過程，來確定所述待測物質經皮吸收的過程和/或在皮膚組織中的聚集部位；其中，所述SHG信號代表皮膚真皮層中的膠原；所述熒光信號代表所述待測物質；

步驟(2)中，采集所述SHG信號和所述熒光信號時，采用的儀器是雙光子掃描共聚焦顯微鏡；

所述待測物質為膠原蛋白。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：采用所述雙光子掃描共聚焦顯微鏡采集所述SHG信號和所述熒光信號時，SHG激發波長為950nm，雙光子熒光激發波長為750nm。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：采用所述雙光子掃描共聚焦顯微鏡采集所述SHG信號和所述熒光信號時，激發光由物鏡聚焦到涂抹了所述待測物質的皮膚組織上，產生的背向SHG信號與熒光信號由同一個放大倍數為25倍、數值孔徑為1.05的水浸顯微鏡物鏡來收集；雙光子熒光通道使用高通濾波片，波長范圍420-460nm；在SHG通道使用窄帶濾波片，波長范圍465-485nm；所述皮膚組織做全層Z軸掃描，步進5μm，圖像采集速度10μm/pixel。