[發明專利]一種與豬源喹賽多作用相關的基因CyaR及制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710110675.5
• 申請日: 2017-02-28
• 公開（公告）號: CN108504659B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 袁宗輝;戴夢紅;于瑞;崔文龍;黃愛新;吳薇;李麗;陸啟榮;王玉蓮;王旭;程古月;劉振利;彭大鵬;郝海紅;黃玲利;陳冬梅;陶燕飛;潘源虎
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/47;C12N15/10;C12N15/85
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001
• 代理人: 王敏鋒

本發明公開了一種與豬源喹賽多作用相關的基因CyaR及制備方法和應用，新基因CyaR的全長cDNA通過末端快速擴增法（RACE）獲得，其序列為SEQ ID NO.1所示，長505bp；CyaR基因編碼一個80個氨基酸的小肽；CyaR基因啟動子起點至上游?148位具有最高的啟動子活性，包含了核心啟動子序列；在?148至?306位之間和?1301至?1845位之間含有轉錄負調控元件。CyaR基因具有促進細胞增殖的作用，可應用于腎細胞、肝細胞、胰島β?細胞的快速增殖。

技術領域

本發明屬于獸醫藥理學和分子藥理學領域，涉及抗菌促生長劑喹賽多作用有關的豬源新基因CyaR，還涉及該基因的制備方法，基因CyaR可用于促進細胞增殖。

背景技術

喹噁啉-1,4-二氧化物是具有廣譜抗菌和促生長雙重功效的動物專用藥物，自上個世紀70年代以來被廣泛應用于養殖業。其代表品種有卡巴氧和喹乙醇，主要作為飼料添加劑用于食品動物。喹賽多是喹噁啉-1,4-二氧化物的一個新品種，保留了喹噁啉-1,4-二氧化物的廣譜抗菌和促生長作用，并且具有毒副作用小、安全性高、用藥后吸收快、消除迅速、殘留期短、無積蓄作用等優點。喹賽多在國內由華中農業大學獸藥研究所首次合成，該研究所對其進行了廣泛而且深入細致的研究。

喹賽多作為喹噁啉類飼料添加劑，對豬、雞、魚等食品動物具有明顯的抗菌促生長作用。隨著畜、禽、水產養殖業生產效率的進一步提高，動物生長的調控機理逐漸受到研究者的重視。王國永等運用相對定量RT-PCR技術研究喹賽多對豬原代肝細胞中胰島素樣生長因子-I(Insulin-like growth factor,IGF-I)和表皮生長因子(Epidermal growthfactor,EGF)mRNA的影響，結果表明：400ng/mL喹賽多處理豬原代肝細胞12h引起IGF-I和EGF的mRNA水平顯著提高，因此推測喹賽多可能是通過對動物體內EGF和IGF-1等生長因子的轉錄調控而發揮作用(王國永等，2004)。朱惠玲等則從內分泌角度，全面系統的研究了喹賽多促進仔豬生長的作用機制。研究推測喹賽多主要通過兩種機制發揮其促生長效應：一是通過提高血液中生長激素(Growth hormone,GH)、胰島素、性激素、IGF等激素水平，同時降低皮質醇與生長抑素濃度，從而加速體內同化作用，刺激骨骼肌蛋白的合成，并抑制蛋白質的分解；二是通過提高EGF、IGF-1、胰島素及胃泌素水平，改善胃腸道黏膜的結構與功能，從而促進營養物質的吸收與利用(朱惠玲等，2007)。丁明星等也發現喹賽多可以增加小腸絨毛膜表面積，促進營養物質的吸收(丁明星等，2005)。然而，在喹賽多的作用下具體哪些基因、哪些蛋白發生了什么樣的變化，這些變化跟喹賽多的作用是直接相關還是間接相關，這些基因或蛋白的功能是什么，對這些問題的解答可以闡明喹賽多促生長的分子作用機制。

研究組織或細胞在藥物等作用下基因表達的差異，進一步克隆差異表達的基因，尋找藥物作用靶標，己成為當今分子藥理學研究的熱點之。基因組由不同基因組成，而每個細胞在特定時期只表達其中的5-15％。這種基因的選擇性表達貫穿于機體整個生命過程，基因表達的變化處于控制生物學調節機制的中心位置，反映了機體特定階段的生命特征。動物受藥物等的作用、生物的發育與分化、細胞的周期變化、生物體對外界環境壓力的應激反應，以及個體的衰老與死亡，甚至正常的代謝過程變化、病理變化，本質上都是基因表達的改變造成的。因此，比較不同處理組的組織細胞在基因表達上的差異，為我們深入了解藥物作用機制打開了方便之門。mRNA差異顯示技術自建立以來作為一種鑒定和分析真核細胞mRNA水平基因表達差異的有效方法，得到不斷的完善和發展，目前已成為尋找由于藥物作用、細胞發育、腫瘤發生等相關的差異基因的簡單快速的方法。