[發(fā)明專利]H10N7禽流感病毒的實時熒光PCR檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710109493.6
• 申請日: 2017-02-27
• 公開（公告）號: CN106702028B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐賽濤;吳勇聰;溫小媛;陶瑞
• 申請（專利權(quán)）人: 解碼（上海）生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686
• 代理公司: 上海碩力知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31251
• 代理人: 劉紅梅

本發(fā)明公開了一種H10N7禽流感病毒的實時熒光PCR檢測試劑盒及檢測方法。試劑盒分別設(shè)計了PCR引物和TaqMan熒光探針,引物包括引物1至4，它們分別具有序列表SEQ.ID.No.1和2、SEQ.ID.No.4和5的堿基序列；探針組包括探針A和探針B，它們分別具有序列表SEQ.ID.No.3和6的堿基序列。本發(fā)明的檢測方法包括：標本處理，RNA核酸提取，RT?PCR擴增反應(yīng)及熒光信號檢測，采用PCR及TaqMan熒光探針技術(shù)能對疑似人感染H10N7禽流感感染者標本H10N7的特異性核酸序列進行基因擴增并檢測，從而判斷H10N7的感染情況。本發(fā)明充分利用了PCR技術(shù)的高擴增性、良好的特異性和熒光檢測技術(shù)的快速敏感性，反應(yīng)結(jié)束時便可根據(jù)擴增曲線判定是否為H10N7禽流感病毒感染。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于體外診斷試劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種H10N7禽流感病毒的實時熒光PCR檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術(shù)

禽流感病毒(Avian Influenza Virus，AIV)屬于正粘病毒科A型流感病毒屬，為單股負鏈RNA，多形態(tài)的有囊膜病毒。禽流感病毒的基因組分為8個節(jié)段，分別編碼HA、NA、NP、NS、MP、PA、PB1和PB2蛋白，病毒囊膜上的纖突，分別具有血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)的活性。這兩個基因是病毒的特異性抗原，根據(jù)HA和NA蛋白抗原性不同，目前可分為16個H亞型(H1-H16)和9個N亞型(N1-N9)。其病原體AIV為單股負鏈分節(jié)段的RNA病毒，其中血凝素(Hemagglutinin，HA)和神經(jīng)氨酸酶(Neuraminidase，NA)是兩個比較重要的基因節(jié)段，Susan等{Baigent,Susan J.,and John W.McCauley.“Glycosylation of haemagglutininand stalk-length of neuraminidase combine to regulate the growth of avianinfluenza viruses in tissue culture.”Virus research 79.1(2001):177-185.}的研究表明HA和NA基因之間存在某種平衡對病毒的致病性有很大關(guān)系。

熒光定量PCR技術(shù)具有敏感、特異、準確可靠、能實現(xiàn)多重反應(yīng)和實時性好等特點，多重熒光PCR采用多對引物擴增檢測多個模板，克服了單重熒光PCR的不足。

當今呼吸道傳染病在全球范圍內(nèi)廣泛傳播與流行，新的病種不斷被發(fā)現(xiàn)，流行地域不斷擴展，流行的頻率不斷增強，人感染H10N7禽流感病毒輸入的危險性日益增高，對國境口岸的衛(wèi)生安全造成了嚴重威脅，因此對呼吸道傳染病的監(jiān)測是國境口岸衛(wèi)生檢疫的重要工作。目前，針對H10N7亞型一步法實時熒光定量RT-PCR方法未見報道，因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員有必要提供一種敏感性好、特異性高、準確可靠、快速方便的人感染H10N7禽流感病毒的實時熒光PCR檢測試劑盒及檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種敏感性好、特異性高、準確可靠、快速方便的H10N7禽流感病毒的實時熒光PCR檢測試劑盒及檢測方法。

為實現(xiàn)上述目的之一提供一種利用實時熒光PCR檢測H10N7禽流感病毒的試劑盒，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：

一種利用實時熒光PCR檢測H10N7禽流感病毒的試劑盒，包括：

(1)RNA提取試劑、實時熒光定量PCR擴增反應(yīng)試劑、陽性對照品、陰性對照品；

(2)引物組和探針組；引物組有引物1至4，分別具有序列表SEQ.ID.No.1和2、SEQ.ID.No.4和5的堿基序列；探針組有探針A和探針B，分別具有序列表SEQ.ID.No.3和SEQ.ID.No.6的堿基序列，所述引物和探針序列如下：

所述的特異性引物為：