[發明專利]一種治療脂多糖/D?氨基半乳糖胺誘導肝損傷的藥物

在審

• 申請號: 201710109088.4
• 申請日: 2017-02-27
• 公開（公告）號: CN106822159A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 潘陳為;陳未來;周光耀;金玲湘;李杰;鄭毅;諸葛璐;方佩佩
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學附屬第二醫院;溫州醫科大學附屬育英兒童醫院
• 主分類號: A61K31/7032
• 分類號: A61K31/7032;A61P1/16;A61K49/00;A61K31/739;A61K31/7008
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙)11491
• 代理人: 黃耀鈞

技術領域

本發明屬于臨床醫學技術領域，尤其涉及一種治療脂多糖/D-氨基半乳糖胺(LPS/GalN)誘導肝損傷的藥物。

背景技術

肝功能衰竭時往往發生內毒素血癥和膿毒癥幾率要明顯增高，并且常常因有效藥物缺乏導致高死亡率。因此，迫切需要對肝損傷開發有靶向性的且明確有效的藥物療法。脂多糖和D-氨基半乳糖胺誘導的急性肝損傷小鼠是一種廣泛使用的肝損傷模型。它多年來已被用于潛在治療藥物的初步藥理學研究。半乳糖胺是肝毒性試劑，肝毒性主要是通過抑制肝細胞RNA和蛋白合成。脂多糖是可以誘導炎性細胞因子的產生的內毒素。這些促炎介質能夠導致肝組織損傷。連翹(作為中國最著名的中藥材之一)已被廣泛用于治療各種感染性疾病，如腎炎，潰瘍、丹毒。連翹是傳統的中成藥雙黃連的主要成分。連翹酯苷A是從連翹果實風干后提取的一種活性成分，已報告其有多個藥理活性，包括抗炎，抗氧化活性。以往的研究表明，連翹酯苷A可以保護防止過氧化氫誘導的細胞凋亡和PC12細胞的氧化應激。此外，連翹酯苷A被發現在抑制LPS誘導的小鼠急性肺損傷和抑制LPS誘導的雞法氏囊炎癥反應。另外，還有研究發現連翹酯苷A對衰老加速小鼠有神經保護作用。LPS/GalN誘導的肝損傷是目前公認的肝損傷模型，本發明采用連翹酯苷A治療LPS/GalN誘導肝損傷，并進一步研究其起效的機制，為肝損傷的治療探討新的方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種治療脂多糖/D-氨基半乳糖胺誘導肝損傷的藥物，旨在解決連翹酯苷A對脂多糖/氨基半乳糖胺誘導的肝損傷的影響仍不清楚的問題。

本發明是這樣實現的，一種治療脂多糖/D-氨基半乳糖胺誘導肝損傷的藥物，所述治療脂多糖/D-氨基半乳糖胺誘導肝損傷的藥物為連翹酯苷A。

本發明的另一目的在于提供一種驗證所述治療脂多糖/D-氨基半乳糖胺誘導肝損傷的藥物的動物模型，所述動物模型為：D-氨基半乳糖胺(GalN)800毫克/千克和LPS 50微克/千克(溶解在PBS中)腹腔注射誘導肝損傷模型。

本發明的另一目的在于提供一種所述動物模型的構建方法，其特征在于，所述構建方法包括：

步驟一，七十五個小鼠隨機分成五組，每組含有15只小鼠；

步驟二，I組:正常對照組，小鼠接受等量的PBS；II組:模型對照組，小鼠接受GalN 800毫克/千克和LPS50微克/千克；III-V組:連翹酯苷A治療組，給予小鼠腹腔注射連翹酯苷A，劑量分別為15毫克/千克，30毫克/千克，60毫克/千克，給藥時間為LPS/半乳糖胺處理前1小時；

步驟三，收集用于后續分析的血液和肝臟組織。

進一步，所述連翹酯苷A減輕LPS/GalN誘導的肝臟病理損傷、丙二醛含量以及血清ALT，AST水平；連翹酯苷A抑制LPS/GalN導致的NF-κB激活、血清TNF-α、肝臟TNF-α水平；連翹酯苷A上調Nrf2和血紅素加氧酶1的表達；連翹酯苷A對LPS/GalN誘導的肝損傷的保護作用是通過激活Nrf2和抑制NF-κB激活而實現。

本發明提供的治療LPS/GalN誘導肝損傷的藥物，連翹酯苷A是從連翹果實風干后提取的一種活性成分，已報告其有多個藥理活性，包括抗炎，抗氧化活性。本發明為了明確連翹酯苷A對LPS/GalN所致的小鼠急性肝損傷的保護作用，LPS(50微克/千克)/GalN(800毫克/千克)誘導構建小鼠急性肝損傷模型。小鼠給藥LPS/GalN后1小時再給藥連翹酯苷A。結果表明，連翹酯苷A可以減輕LPS/GalN誘導的肝臟病理損傷、丙二醛(MDA)含量以及血清ALT，AST水平。此外，連翹酯苷A抑制LPS/GalN導致的NF-κB激活、血清TNF-α、肝臟TNF-α水平。此外，發現，連翹酯苷A上調Nrf2和血紅素加氧酶1的表達。結果表明，連翹酯苷A對LPS/GalN誘導的肝損傷的保護作用是通過激活Nrf2和抑制NF-κB激活而實現。

附圖說明

圖1是本發明實施例提供的驗證治療LPS/GalN誘導肝損傷的藥物的模型構建方法流程圖。

圖2是本發明實施例提供的各組小鼠血清ALT、AST水平示意圖。

圖3是本發明實施例提供的HE染色(200×)示意圖；

圖中：A:正常對照組；B：LPS/GalN組；C：LPS/GalN+連翹酯苷A(15mg/kg)組；D：LPS/GalN+連翹酯苷A(30mg/kg)組；E組：LPS/GalN+連翹酯苷A(60mg/kg)組。

圖4是本發明實施例提供的各組血清和肝臟組織TNF-α水平示意圖。