[發明專利]一種煙草花葉病毒衣殼蛋白膠囊的制備方法

有效

• 申請號: 201710108547.7
• 申請日: 2017-02-27
• 公開（公告）號: CN106822030B
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 牛忠偉;王兆程
• 申請（專利權）人: 中國科學院理化技術研究所
• 主分類號: A61K9/48
• 分類號: A61K9/48;A61K47/42;C08J3/24;C08L89/00
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 張文祎;趙曉丹

本發明公開一種煙草花葉病毒衣殼蛋白膠囊的制備方法，包括：制備煙草花葉病毒衣殼蛋白溶液，將煙草花葉病毒衣殼蛋白溶液與油相混合形成乳液，之后調節體系的酸堿度來控制煙草花葉病毒衣殼蛋白形成棒狀組裝結構，再使用戊二醛作為交聯劑使棒狀煙草花葉病毒衣殼蛋白在油水界面處進行交聯，得到煙草花葉病毒衣殼蛋白膠囊。本發明煙草花葉病毒衣殼蛋白膠囊的制備方法步驟簡單、制備周期短，制備得到的蛋白膠囊表面包覆率高，膠囊結構堅固且均一。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域。更具體地，涉及一種煙草花葉病毒衣殼蛋白膠囊的制備方法。

背景技術

為了應對生物醫藥領域中活性物質可控釋放和靶向傳遞的挑戰，需要提供高效能、耐久性的藥物裝載方法。傳統的藥物裝載方法因低溶解性、高毒性、與其他物質易發生相互作用越來越不適應于現有臨床藥物的應用。

蛋白質膠囊是一種外部為微米或納米大小的聚合物殼，內部包裹著活性物質的結構，其使用蛋白質作為前體物質可以得到具有低免疫原性的傳遞材料，并且可以特異性的傳遞藥物至疾病組織而不影響健康組織，是目前最具前景的可控釋放的載體工具之一。

微乳液制備方法是蛋白質膠囊應用最廣泛的制備方法。這種方法使用兩種不混溶的液體，一般來說是一種油相和一種水相。活性物質通常溶于油相之中作為被包裹相，水相通常包含蛋白質前體分子用于形成殼體。兩種不混溶相形成的微乳液作為模板用于在相界面處合成膠囊。

煙草花葉病毒是一種棒狀植物病毒，作為最早被發現及研究的一種植物病毒，其各方面的特性都已經被非常深入的研究。然而，目前為止并沒有煙草花葉病毒衣殼蛋白在乳液界面組裝制備蛋白膠囊方面的研究報道。因此，提供一種制備煙草花葉病毒衣殼蛋白膠囊的方法具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種以煙草花葉病毒衣殼蛋白作為材料制備蛋白膠囊的方法。該制備方法步驟簡單、制備周期短，控制煙草花葉病毒衣殼蛋白組裝為棒狀結構作為蛋白膠囊的組成基元，以獲得較為堅固的蛋白膠囊結構。

為達到上述目的，本發明采用下述技術方案：

一種煙草花葉病毒衣殼蛋白膠囊的制備方法，包括以下步驟：

1)煙草花葉病毒衣殼蛋白溶液的制備

在煙草花葉病毒溶液中加入乙酸，混勻后靜置，離心去除RNA沉淀；將上清液過脫鹽柱分離，去除乙酸，將所得到的溶液在去離子水中透析12-24h，離心，將所得的沉淀用磷酸緩沖溶液復溶，得到煙草花葉病毒衣殼蛋白溶液；

2)煙草花葉病毒衣殼蛋白乳液的制備

在煙草花葉病毒衣殼蛋白溶液中，加入油相，充分混合，得到煙草花葉病毒衣殼蛋白乳液；

3)煙草花葉病毒衣殼蛋白膠囊的制備

在煙草花葉病毒衣殼蛋白乳液中滴加稀鹽酸調節酸堿度，之后在體系中加入交聯劑，在4℃的條件下反應6h使煙草花葉病毒衣殼蛋白在油水界面處交聯得到煙草花葉病毒衣殼蛋白膠囊。

優選地，步驟1)中，所述煙草花葉病毒溶液的濃度為5-20mg/ml，與乙酸的體積比為1:2，混勻后靜置30-40min；在該條件下煙草花葉病毒衣殼蛋白能夠充分的被解離出來而又保持其生理活性；

優選地，步驟1)中，所述磷酸緩沖溶液為20-200mM的pH＝8.0的磷酸緩沖溶液；更優選的，為100mM的pH＝8.0的磷酸緩沖溶液，在該條件下煙草花葉病毒衣殼蛋白能夠最好的保持其生理活性；

優選地，步驟1)中，所述離心為在4℃條件下以8000-10000rpm離心8-12min；