[發(fā)明專(zhuān)利]雜交瘤細(xì)胞株QW8#及其產(chǎn)生的抗Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯通用單克隆抗體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710107592.0
• 申請(qǐng)日: 2017-02-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106701689B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李培武;唐曉倩;張奇;張兆威;張文
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/20;C07K16/44;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專(zhuān)利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

本發(fā)明涉及雜交瘤細(xì)胞株QW8#及其產(chǎn)生的抗Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯通用單克隆抗體。本發(fā)明提供的雜交瘤細(xì)胞株QW8#，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO.C2016164。可以用于制備高親和力抗Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯通用單克隆抗體，酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)法測(cè)得親和力可達(dá)8.5×10⁸L/moL；本發(fā)明提供的抗Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯通用單克隆抗體為廣譜特異性單克隆抗體，其靈敏度高、特異性好，對(duì)醚菊酯的50％抑制濃度IC₅₀為20.86μg/L，對(duì)氯菊酯的50％抑制濃度IC₅₀為24.2μg/L，對(duì)苯醚菊酯的50％抑制濃度IC₅₀為29.4μg/L，對(duì)其他Ⅰ型和Ⅱ型擬除蟲(chóng)菊酯菊酯的交叉反應(yīng)率均小于1％；可應(yīng)用于Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯的多殘留檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及雜交瘤細(xì)胞株QW8#及其產(chǎn)生的抗Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯通用單克隆抗體。

背景技術(shù)

擬除蟲(chóng)菊酯是一類(lèi)低毒、高效、低殘留的廣譜性殺蟲(chóng)劑。傳統(tǒng)的擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥屬于羧酸酯化合物，分為Ⅰ型和Ⅱ型兩大類(lèi)。Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯主要包括氯菊酯、苯醚菊酯、生物芐呋菊酯、聯(lián)苯菊酯等，Ⅱ型擬除蟲(chóng)菊酯主要包括氰戊菊酯、溴氰菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、苯醚氰菊酯、氟氯氫菊酯等。長(zhǎng)期低劑量的接觸擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑會(huì)引起慢性疾病，有的具有免疫系統(tǒng)毒性和心血管毒性等，而且擬除蟲(chóng)菊酯是一種神經(jīng)毒劑，會(huì)改變神經(jīng)膜的通透性，影響神經(jīng)傳導(dǎo)從而導(dǎo)致中毒癥狀，另外其對(duì)腦組織生物膜、神經(jīng)生理學(xué)、神經(jīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及神經(jīng)遞質(zhì)等方面均有一定的影響。然而，由于擬除蟲(chóng)菊酯的高效及光譜性，其占全球殺蟲(chóng)劑市場(chǎng)的30％，其中95％以上用于農(nóng)業(yè)病蟲(chóng)害的防治，主要用于糧食、蔬菜、茶葉、水果、棉花，少數(shù)用于畜禽、公共和家庭衛(wèi)生害蟲(chóng)的防治，大量廣泛的使用難免造成農(nóng)藥殘留。因此研究環(huán)境以及農(nóng)產(chǎn)品、食品中痕量擬除蟲(chóng)菊酯殺蟲(chóng)劑的檢測(cè)方法具有重要的意義。

現(xiàn)有擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥的檢測(cè)方法主要分為儀器分析法和酶聯(lián)免疫分析法。儀器分析法是借助大型精密儀器對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯進(jìn)行精確定量檢測(cè)。主要包括:液相色譜法、氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用和液質(zhì)聯(lián)用等，該類(lèi)方法靈敏度高，準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn)，但是其所需的儀器設(shè)備昂貴，前處理復(fù)雜，限制了其在農(nóng)藥殘留現(xiàn)場(chǎng)篩查及檢測(cè)的大規(guī)模推廣應(yīng)用。由于大型儀器分析的局限性，免疫分析被廣泛的應(yīng)用于擬除蟲(chóng)菊酯的定量檢測(cè)中。該方法將酶催化反應(yīng)的放大作用和抗原抗體親和反應(yīng)高度專(zhuān)一性、特異性相結(jié)合，具有簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，適于現(xiàn)場(chǎng)批量檢測(cè)等。免疫分析是利用抗原和抗體的特異性的結(jié)合反應(yīng)和抗體、抗原上的標(biāo)記物的生物、物理或化學(xué)放大作用來(lái)對(duì)超微量殘留物進(jìn)行定性、定量檢測(cè)，所以要研究建立針對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥的任何一種免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，都必須先獲得抗擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥的抗體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的問(wèn)題是提供雜交瘤細(xì)胞株QW8#及其產(chǎn)生的抗Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯通用單克隆抗體。

本發(fā)明提供了雜交瘤細(xì)胞株QW8#，該細(xì)胞株已于2016年8月30日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為CCTCCNO.C2016164。其具有序列表中SEQ ID NO:1所示的抗Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯單克隆抗體重鏈可變區(qū)編碼基因序列和序列表中SEQ ID NO:2所示的抗Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯單克隆抗體可變區(qū)編碼基因序列。

抗Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯通用單克隆抗體，它由保藏編號(hào)為CCTCC NO.C2016164的雜交瘤細(xì)胞株QW8#分泌產(chǎn)生。其重鏈可變區(qū)具有序列表中SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；輕鏈可變區(qū)具有序列表中SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。該抗Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯單克隆抗體可以廣譜識(shí)別Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯，對(duì)醚菊酯的50％抑制濃度IC₅₀為20.86μg/L，對(duì)氯菊酯的50％抑制濃度IC₅₀為24.2μg/L，對(duì)苯醚菊酯的50％抑制濃度IC₅₀為29.4μg/L。

抗Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯通用單克隆抗體在Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯的多殘留測(cè)定中的應(yīng)用。