[發(fā)明專利]一種水稻高溫抗性突變株的篩選方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710104408.7 | 申請日： | 2017-02-24 |
| 公開（公告）號： | CN106818487B | 公開（公告）日： | 2018-10-12 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 宋立勝 | 申請（專利權(quán)）人： | 新沂宏志商務(wù)服務(wù)中心 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
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| 地址： | 221400 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 水稻 高溫 抗性 突變 篩選 方法 | ||
1.一種水稻高溫抗性突變株的篩選方法，其特征在于：該篩選方法步驟如下：
1）選擇優(yōu)良的粳稻品種/系作為高溫抗性突變株篩選源：選取產(chǎn)量高、米質(zhì)好、抗性優(yōu)良但不耐熱的粳稻品種/系作為高溫抗性突變株的篩選源；
2）取突變株篩選源的花藥進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，得到花藥愈傷后進(jìn)行熱處理：將突變株篩選源正季種植，選取健壯主穗花藥進(jìn)行花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)，獲得花藥愈傷組織，待花藥愈傷組織普遍長至直徑0.3～0.6cm后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)室溫度至36～38℃，持續(xù)5～7天；
3）挑選花藥愈傷轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基，進(jìn)行常溫分化培養(yǎng)～熱處理循環(huán)：挑選直徑為0.4～0.7cm的花藥愈傷組織，轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基，進(jìn)行常溫分化培養(yǎng)，溫度控制為25～27℃，時(shí)間控制為7～9天，再變換為熱處理，溫度控制為36～38℃，時(shí)間控制為3～4天，然后恢復(fù)至常溫分化培養(yǎng)，如此常溫分化培養(yǎng)～熱處理循環(huán)4～5次至褐化愈傷組織部分達(dá)到90%；
4）將活性愈傷投入復(fù)蘇劑中浸泡，然后轉(zhuǎn)入新分化培養(yǎng)基中繼續(xù)分化培養(yǎng)：熱處理后愈傷組織絕大部分褐化變黑，一些愈傷組織白化喪失活性，切下褐化和白化部分，將留下的活性愈傷投入復(fù)蘇劑中浸泡處理，然后將活性愈傷轉(zhuǎn)入新的分化培養(yǎng)基中繼續(xù)分化培養(yǎng)；
5）愈傷組織誘導(dǎo)出苗后，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中壯苗，煉苗后移栽入溫室：部分愈傷組織經(jīng)過熱處理、復(fù)蘇劑處理后存活下來，并分化出苗，待花培苗長至2cm之后轉(zhuǎn)接于繼代培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗，待花培苗長至8cm后打開封口膜煉苗，10～15天后移栽入溫室；
6）花培苗單株收種獲得花培家系，進(jìn)一步高溫抗性篩選獲得高溫抗性突變株：溫室內(nèi)花培單株收種，獲得粳稻花培家系若干，正季將收獲的花培家系大田種植，以篩選源為對照，篩選耐熱性得到改良的水稻高溫抗性突變株；
所述步驟2）中進(jìn)行花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)的具體過程如下：
（2.1）取材與預(yù)處理：將選取的突變株篩選源正季大田常規(guī)栽培，取葉枕距為5～7cm、穗與花藥呈淡黃綠色、花藥長度為穎殼的1/3～1/2且孕穗不裂開的健壯主穗，保留2～3張葉片，75%酒精表面消毒，用濕紗布包裹后置于4℃冰箱中低溫預(yù)處理2～3天；
（2.2）接種：預(yù)處理后，將含主穗的稻苞剪下，然后將該稻苞浸泡于75%的酒精中表面消毒3～4min，接著將該稻苞轉(zhuǎn)移于超凈工作臺(tái)中剝離主穗，進(jìn)一步剝?nèi)⌒∷霝榇笮【鶆虻男≈Ч＃酉聛碛孟具^的紗布包裹小支梗，然后將紗布投入濃度為0.1%的升汞滅菌10min，無菌水漂洗3～4次，打開紗布晾干，最后用消毒過的剪刀剪開花藥上部，抖藥法接種花藥于誘導(dǎo)培養(yǎng)基；誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：N6大量元素+MS微量元素+MS有機(jī)質(zhì)+2mg/L2,4-D+0.5mg/LNAA+0.5mg/L水解蛋白+5%蔗糖+0.8%植物凝膠，pH值為5.8；
所述步驟3）和4）中分化培養(yǎng)基配方為：MS無機(jī)鹽+MS有機(jī)物+蔗糖3%+瓊脂0.7%+KT2.0mg/L+NAA0.5 mg/L+水解蛋白1g/L，pH值為5.8；
所述步驟4）中復(fù)蘇劑成分為：每升水含維生素C 0.3～0.4g，維生素E 0.6～0.8g，Na2-EDTA 0.8～1.0g，F(xiàn)eSO4?7H2O 0.5～0.7g，ZnSeO4·5H2O1.2～1.5g，MgSO4·7H2O 0.6～0.8g，植物硫化激動(dòng)素PSK-α 0.02～0.03μmol；
步驟5）中繼代培養(yǎng)基配方為：1/2MS大量+MS微量+MS有機(jī)物+蔗糖3%+多效唑 0.2～0.3mg/L+瓊脂0.8%，pH值為5.8。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水稻高溫抗性突變株的篩選方法，其特征在于：所述步驟2）中誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件控制為：溫度26～28℃，暗培養(yǎng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水稻高溫抗性突變株的篩選方法，其特征在于：所述步驟3）常溫分化培養(yǎng)與熱處理的光照條件均為：光照強(qiáng)度為1000～1500Lux，光周期為14h光/10h暗。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水稻高溫抗性突變株的篩選方法，其特征在于：所述步驟4）中活性愈傷特點(diǎn)為：結(jié)構(gòu)疏松、表面具球形顆粒、顏色淺而透明。
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