[發明專利]鑒定藥物分子的靶標蛋白質的方法

有效

• 申請號: 201710104263.0
• 申請日: 2017-02-21
• 公開（公告）號: CN107884370B
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 樸勝范;樸漢今
• 申請（專利權）人: 斯帕克生物制藥有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N27/447
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 金鮮英;宋海花

1.一種鑒定藥物分子的靶標蛋白質的方法，其包括以下步驟：

(a)步驟，制造包含細胞溶解物或來源于人體的細胞的混合物A；

(b)步驟，制造混合物B，所述混合物B是細胞溶解物和藥物分子的混合物、或來源于人體的細胞和藥物分子的混合物；

(c)步驟，使所述混合物A和所述混合物B的溫度變成可誘導熱變性的溫度范圍，并通過離心分離使變性的蛋白質沉淀；

(d)步驟，在所述(c)步驟中獲得的溫度為可誘導熱變性范圍的混合物A及混合物B中分別混合熒光波長彼此不同的熒光物質，對存在于混合物A及混合物B的溶液部分中的蛋白質分別標記所述熒光波長彼此不同的熒光物質；

(e)步驟，將所述(d)步驟中獲得的混合物A及混合物B混合而制造混合物C；

(f)步驟，將所述混合物C進行電泳；及

(g)步驟，對于因所述(f)步驟的電泳而在凝膠中出現的蛋白質點分析熒光波長，確認因所述(c)步驟而顯示出熱穩定性變化的蛋白質。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述(c)步驟的可誘導熱變性的溫度范圍為37～70℃范圍。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，進一步包括對所述(g)步驟的各蛋白質點繪制解鏈曲線圖表的步驟。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述(b)步驟的藥物分子為生理活性分子。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述(g)步驟中獲得的蛋白質為膜錨定蛋白質。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述(g)步驟的熱穩定性變化中，通過將存在于所述混合物B中的蛋白質與所述藥物分子結合從而實現熱穩定化。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述蛋白質為核仁磷酸蛋白，所述藥物分子為作為生理活性分子的大麥芽堿。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述(g)步驟的熱穩定性變化中，通過將存在于所述混合物B中的蛋白質與所述藥物分子結合從而實現熱不穩定化。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述蛋白質為蛋白激酶Cα，所述藥物分子為作為生理活性分子的苔蘚抑素1。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述(d)步驟的熒光物質為選自由Cy2、Cy3、Cy5、熒光素、Alexafluor488、R6G、HEX、AlexaFluor32、TAMRA、AlexaFluor546、EtBr、SYPRO Ruby和Blue FAM組成的組中的任意一種以上。

11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述(d)步驟中，與混合物A混合的熒光物質為Cy3，與混合物B混合的熒光物質為Cy5。

12.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，所述Cy3和Cy5進一步結合有胺反應性官能團。

13.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述(g)步驟的分析熒光波長是，通過分析由存在于所述混合物A的溶液部分的蛋白質所被標記的熒光物質產生的熒光波長與由存在于所述混合物B的溶液部分的蛋白質所被標記的熒光物質產生的熒光波長的比率而實現。

14.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述(f)步驟的電泳為雙向凝膠電泳。