[發(fā)明專利]MrgprX2高表達(dá)的重組細(xì)胞及MrgprX2高表達(dá)膜受體固定相及制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710100941.6
• 申請(qǐng)日: 2017-02-23
• 公開（公告）號(hào): CN106754731B
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賀浪沖;張濤;韓省力;馬維娜;曹嬌;賀懷貞;劉瑞;車德路;呂艷妮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西安交通大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/867;C07K17/14;G01N33/68
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 岳培華

1.一種MrgprX2高表達(dá)的重組細(xì)胞在識(shí)別以MrgprX2為靶點(diǎn)的類過敏組分方面的應(yīng)用，其特征在于：所述類過敏組分為鹽酸青藤堿；所述重組細(xì)胞是以HEK293細(xì)胞為宿主細(xì)胞，轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的外源性表達(dá)載體是包含MrgprX2全長基因的表達(dá)載體；所述MrgprX2全長基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。

2.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述包含MrgprX2全長基因的表達(dá)載體是慢病毒LV5-MrgprX2。

3.一種MrgprX2高表達(dá)的膜受體固定相在識(shí)別以MrgprX2為靶點(diǎn)的類過敏組分方面的應(yīng)用，其特征在于：所述類過敏組分為鹽酸青藤堿；所述MrgprX2高表達(dá)膜受體固定相由活化硅膠吸附權(quán)利要求1-2之一中所述的MrgprX2高表達(dá)的重組細(xì)胞的細(xì)胞膜制成；所述MrgprX2全長基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。

4.權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，所述的MrgprX2高表達(dá)膜受體固定相的制備方法包括以下步驟：

1)制備細(xì)胞膜混懸液

將培養(yǎng)好的MrgprX2高表達(dá)的重組細(xì)胞離心、清洗，然后在冰浴條件下，將MrgprX2高表達(dá)的重組細(xì)胞超聲破碎，通過差速離心除去細(xì)胞器，分離出細(xì)胞膜，再將細(xì)胞膜用生理鹽水重懸，制得細(xì)胞膜混懸液；

2)制備MrgprX2高表達(dá)膜受體固定相

將硅膠活化后置于具支試管中，真空條件下，向具支試管中加入步驟1)制得的細(xì)胞膜混懸液，渦旋振蕩，然后靜置過夜，得到MrgprX2高表達(dá)膜受體固定相。

5.一種MrgprX2高表達(dá)的膜受體固定相細(xì)胞膜色譜柱在識(shí)別以MrgprX2為靶點(diǎn)的類過敏組分方面的應(yīng)用，其特征在于：所述類過敏組分為鹽酸青藤堿；所述MrgprX2高表達(dá)的膜受體固定相細(xì)胞膜色譜柱由權(quán)利要求4中所述的MrgprX2高表達(dá)膜受體固定相經(jīng)濕法裝柱后制得；所述MrgprX2全長基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。