[發(fā)明專利]能特異性結(jié)合c-Myc標(biāo)簽的納米抗體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710100770.7
• 申請(qǐng)日: 2017-02-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106946991B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李燕萍;涂追;付金衡;許楊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K16/32
• 分類號(hào): C07K16/32;C07K1/22;C12N15/13;G01N33/68;B01J20/24
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• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，具體為針對(duì)c?Myc標(biāo)簽的單域重鏈抗體，其具有SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列，可用于免疫檢測(cè)、抗原富集純化等領(lǐng)域。本發(fā)明所提供的氨基酸序列可以作為前體，通過(guò)隨機(jī)或定點(diǎn)突變技術(shù)進(jìn)行改造，能夠獲得性質(zhì)(親和性、特異性、穩(wěn)定性等)更好的突變體，用來(lái)發(fā)展進(jìn)一步用于醫(yī)藥、工業(yè)、農(nóng)業(yè)的蛋白質(zhì)或多肽。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及單域重鏈抗體技術(shù)(又稱納米抗體技術(shù))，以及基因工程抗體技術(shù)，特別是針對(duì)c-Myc標(biāo)簽的單域重鏈抗體或多肽。

技術(shù)背景

c-Myc標(biāo)簽蛋白的發(fā)現(xiàn)源于1985年Evan制備獲得了一株針對(duì)人原癌基因產(chǎn)物Myc蛋白的單克隆抗體9E10，此后研究發(fā)現(xiàn)該抗體識(shí)別的表位由10個(gè)氨基酸殘基組成，其序列為Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu，并且這10個(gè)氨基酸與其它蛋白融合表達(dá)后依然能夠保持很強(qiáng)的抗原活性，可以被相應(yīng)抗體識(shí)別，而且不受到蛋白框架的影響。因此，c-Myc標(biāo)簽系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)檢測(cè)、細(xì)胞成像、親和純化以及蛋白質(zhì)工程等領(lǐng)域。

本發(fā)明公開(kāi)了一種可以與c-Myc標(biāo)簽特異性結(jié)合的單域重鏈抗體(即納米抗體，下同)，可用于c-Myc標(biāo)簽融合蛋白的檢測(cè)及純化。

目前市場(chǎng)上已經(jīng)有針對(duì)c-Myc標(biāo)簽的單克隆或多克隆抗體用于檢測(cè)，但單克隆抗體的研發(fā)和生產(chǎn)過(guò)程及其繁瑣和復(fù)雜，多克隆抗體來(lái)源有限。相比之下，單域重鏈抗體僅由一個(gè)結(jié)構(gòu)域組成，具有耐酸堿、耐高溫、特異性高、分子量小和可大規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，用單域重鏈抗體作為配基制備的純化介質(zhì)具有成本低、可重復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用前景廣闊。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供針對(duì)c-Myc標(biāo)簽的單域重鏈抗體，可以被用于制備檢測(cè)和純化c-Myc標(biāo)簽的試劑和工具。

本發(fā)明提供一個(gè)針對(duì)c-Myc標(biāo)簽的單域重鏈抗體(即本發(fā)明能特異性結(jié)合c-Myc標(biāo)簽的納米抗體，下同)，具有SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列。其氨基酸序列的IMGT編號(hào)和結(jié)構(gòu)域的劃分包括四個(gè)框架區(qū)(Framework region,FR)和三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(Complementarity-determining region,CDR)。

本發(fā)明提供一個(gè)核酸分子，其特征是編碼SEQ ID NO.:1，通過(guò)遺傳密碼子可以隨時(shí)獲得該核酸分子的具體序列。

本發(fā)明還提供一個(gè)核酸分子，其特征是編碼SEQ ID NO.:1部分結(jié)構(gòu)域，通過(guò)遺傳密碼子可以隨時(shí)獲得該核酸分子的具體序列。可以為SEQ ID NO.:2核酸分子。

本發(fā)明所提供的核苷酸序列或者至少部分序列可以通過(guò)合適的表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)以得到相應(yīng)的蛋白質(zhì)或多肽。這些表達(dá)系統(tǒng)包括細(xì)菌，酵母菌，絲狀真菌，動(dòng)物細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞，植物細(xì)胞，或無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。

本發(fā)明還提供一種載體，包含所述核酸序列。由于遺傳密碼子具有簡(jiǎn)并性，該核酸序列可以根據(jù)不同的應(yīng)用目的而不同。

本發(fā)明還提供一種宿主細(xì)胞，包括所述蛋白質(zhì)或表達(dá)載體。

本發(fā)明還提供一種檢測(cè)c-Myc標(biāo)簽的方法，含有本發(fā)明所述針對(duì)c-Myc標(biāo)簽的單域重鏈抗體。基于本發(fā)明提供的針對(duì)c-Myc標(biāo)簽的單域重鏈抗體與c-Myc標(biāo)簽特異性結(jié)合的能力，建立c-Myc標(biāo)簽的檢測(cè)方法。其中，優(yōu)選的方法包括酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)，熒光免疫法(Fluoroimmunoassay,FIA)，免疫芯片法，親和層析法和免疫層析法等。

本發(fā)明所提供的氨基酸序列可以作為前體，通過(guò)隨機(jī)或定點(diǎn)突變技術(shù)進(jìn)行改造，能夠獲得性質(zhì)(水溶性、穩(wěn)定性、親和力以及特異性等)更好的突變體，該突變體能與c-Myc標(biāo)簽特異性結(jié)合。