[發(fā)明專利]利用植物基原料和內(nèi)生菌共培養(yǎng)制備生物活性物質(zhì)的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710100748.2
• 申請日: 2017-02-23
• 公開（公告）號: CN106916853A
• 公開（公告）日: 2017-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳集雙;陳國晶;樊小寬;王煒;張保錢;金磊磊;張本厚;胡燕花
• 申請（專利權(quán)）人: 南京博方生物科技有限公司
• 主分類號: C12P1/02
• 分類號: C12P1/02;C12P1/04;C12P1/06
• 代理公司: 南京正聯(lián)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司32243
• 代理人: 王素琴

1.一種利用植物基原料和內(nèi)生菌共培養(yǎng)制備生物活性物質(zhì)的方法，具體包括以下步驟：

（1）植物基原料的預(yù)處理：取無菌培養(yǎng)的活體植物細(xì)胞、植物組織或器官繁殖體，或?qū)⒅参锘辖?jīng)過烘干和/或造粉和滅菌預(yù)處理；

（2）內(nèi)生菌活化：將內(nèi)生菌接種于微生物培養(yǎng)基上進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，預(yù)培養(yǎng)時間為1-25天，從而制得活化的內(nèi)生菌；

（3）生物材料與內(nèi)生菌共培養(yǎng)：在共培養(yǎng)設(shè)備中接種步驟（2）中制得的活化的內(nèi)生菌中，并加入步驟（1）中所制得的含植物基材料的固體或液體培養(yǎng)基進(jìn)行混合培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為4-90天，獲得共培養(yǎng)產(chǎn)物；

（4）生物活性物質(zhì)的提取：將步驟（3）中獲得的共培養(yǎng)產(chǎn)物根據(jù)所需的生物活性物質(zhì)的特點，采用醇提、水提、超臨界提取、層析收集和噴霧干燥方法，獲得生物活性物質(zhì)的濃縮，再分離和純化，得到生物活性物質(zhì)。

2.如權(quán)利要求1所述的利用植物基原料和內(nèi)生菌共培養(yǎng)制備生物活性物質(zhì)的方法，其特征在于，所述植物基原料包括活的植物細(xì)胞和組織、組織培養(yǎng)所獲得無性繁殖體和植物生物質(zhì)；所述活的植物細(xì)胞和組織包括種子、細(xì)胞、新鮮莖、葉和根；組織培養(yǎng)所獲得無性繁殖體包括愈傷組織、原球莖、幼苗、毛狀根和胚狀體；植物生物質(zhì)包括藥用植物莖稈、葉片、汁液、粉末和植物的愈傷組織、種苗、毛狀根和提取物。

3.如權(quán)利要求2所述的利用植物基原料和內(nèi)生菌共培養(yǎng)制備生物活性物質(zhì)的方法，其特征在于，共培養(yǎng)內(nèi)生菌為具有產(chǎn)生生物活性物質(zhì)能力的植物內(nèi)生真菌或內(nèi)生細(xì)菌或放線菌，是從產(chǎn)生生物活性物質(zhì)的藥用植物中分離獲得的。

4.如權(quán)利要求2所述的利用植物基原料和內(nèi)生菌共培養(yǎng)制備生物活性物質(zhì)的方法，其特征在于，所述步驟（3）中的所述共培養(yǎng)設(shè)備包括固體發(fā)酵設(shè)備、植物生物反應(yīng)器、發(fā)酵罐、培養(yǎng)瓶中的一種或兩種以上。

5.如權(quán)利要求3所述的利用植物基原料和內(nèi)生菌共培養(yǎng)制備生物活性物質(zhì)的方法，其特征在于，所述共培養(yǎng)產(chǎn)物是指培養(yǎng)液和/或混合培養(yǎng)物和/或培養(yǎng)后植物材料和/或培養(yǎng)后內(nèi)生菌菌體；也可以是固體發(fā)酵產(chǎn)物。

6.如權(quán)利要求5所述的利用植物基原料和內(nèi)生菌共培養(yǎng)制備生物活性物質(zhì)的方法，其特征在于，所述步驟（3）中所獲得的共培養(yǎng)產(chǎn)物，可以作為下一代培養(yǎng)的種子菌，循環(huán)擴(kuò)大培養(yǎng)3-5代，且擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)基中含有/或不含有植物基原料。

7.如權(quán)利要求6所述的利用植物基原料和內(nèi)生菌共培養(yǎng)制備生物活性物質(zhì)的方法，其特征在于，所述步驟（2）中內(nèi)生菌活化的預(yù)培養(yǎng)時間為3-10天；所述步驟（3）中生物材料與內(nèi)生菌共培養(yǎng)中進(jìn)行混合培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為7-50天。

8.如權(quán)利要求6所述的利用植物基原料和內(nèi)生菌共培養(yǎng)制備生物活性物質(zhì)的方法，其特征在于，所述步驟（3）中加入步驟（1）中所制得的含植物基材料的固體或液體培養(yǎng)基與內(nèi)生菌一同加入，培養(yǎng)時間為7~50天。

9.如權(quán)利要求6所述的利用植物基原料和內(nèi)生菌共培養(yǎng)制備生物活性物質(zhì)的方法，其特征在于，所述步驟（3）中加入步驟（1）中所制得的含植物基材料的固體或液體培養(yǎng)基在內(nèi)生菌接種培養(yǎng)3-20天后加入，加入后繼續(xù)培養(yǎng)4-60天。

10.如權(quán)利要求9所述的利用植物基原料和內(nèi)生菌共培養(yǎng)制備生物活性物質(zhì)的方法，其特征在于，所述步驟（3）中加入步驟（1）中所制得的含植物基材料的固體或液體培養(yǎng)基在內(nèi)生菌接種培養(yǎng)4-10天后加入，加入后繼續(xù)培養(yǎng)15-45天。