[發明專利]一種益生菌群及其制備方法

在審

• 申請號: 201710100713.9
• 申請日: 2017-02-23
• 公開（公告）號: CN106635932A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 陳集雙;石京山;魏永強;李曉飛;夏吉榮;陳錦周;賈啟;張本厚
• 申請（專利權）人: 遵義醫學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;A61K36/076;A61K35/747;A61K35/745;A61K35/744;A61K35/742;A61K35/741;A61P17/00;A61P17/04;A61P31/10;A61P15/00;C12R1/07
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司32243
• 代理人: 王素琴

1.一種益生菌群，其特征在于，所述益生菌群是由芽孢桿菌、乳酸桿菌、酪酸梭菌、雙歧桿菌、糞鏈球菌、放線菌、酵母菌、光合細菌中的3種或3種以上的益生菌組成的穩定制劑。

2.如權利要求1所述的益生菌群，其特征在于，所述益生菌群通過單獨發酵與混合發酵相結合而制得。

3.如權利要求2所述的益生菌群，其特征在于，所述放線菌采用單獨發酵，所述芽孢桿菌和乳酸菌采用混合發酵。

4.如權利要求2所述的益生菌群，其特征在于，所述益生菌群采用避光密封保存，保存溫度為3~25℃。

5.如權利要求1~4任一項所述的益生菌群，其特征在于，所述益生菌群為水劑或凍干粉。

6.一種如權利要求1-5任一項所述的益生菌群的應用，其特征在于，所述益生菌群的使用范圍包括：用于預防、治療或協助治療腳氣、婦科病、性傳播疾病、皮炎病癥；所述皮炎病癥包括濕疹或瘙癢皮膚不適應癥。

7.如權利要求6所述的所述的益生菌群的應用，其特征在于，所述益生菌群為水劑時，在使用時，先將益生菌群稀釋5~500倍后，再采用浸泡或擦洗或涂抹或噴霧的方法使用；所述益生菌群為凍干粉時，在使用時，采用常溫水溶解后再稀釋5~500倍，再采用浸泡或擦洗或涂抹或噴霧的方法使用；使用稀釋液直接對皮膚或發病部位進行浸泡或涂抹或噴霧；用于預防腳氣時，在足療之后12小時內，接對腳部進行浸泡或涂抹或噴霧。

8.一種制備如權利要求1-5任一項所述的益生菌群的方法，具體步驟如下：

a、使用多層TPY 培養基劃線接種雙歧桿菌， 培養基pH值為6.8~7.2，37℃條件厭氧培養50h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成雙岐桿菌細菌懸液；使用多層MRS 培養基劃線接種乳酸桿菌種，培養基pH值為6.4~6.6，37℃條件厭氧培養30h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/1ml 懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成乳酸桿菌細菌懸液；使用高氏一號培養基劃線接種放線菌，培養基pH值為7.3~7.6，37℃條件厭氧培養48 h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成放線菌細菌懸液；使用YPD培養基劃線接種酵母菌，培養基pH值為5.3~5.5，37℃條件厭氧培養36 h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成酵母菌細菌懸液；使用THB培養基劃線接種糞鏈球菌，培養基pH值為7.5~7.9，37℃條件厭氧培養40h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成糞鏈球菌細菌懸液；使用J-瓊脂培養基接種芽孢桿菌或酪酸梭菌，培養基pH值為7.5~7.9，37℃條件厭氧培養40h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成芽孢桿菌或酪酸梭菌細菌懸液；

b、準備水浴式冷凍干燥裝置，所述水浴式冷凍裝置包括可抽真空的殼體、設置在所述殼體內部的鹽水池和懸于所述鹽水池上方并可自由升降的掛架，所述鹽水池內盛放有飽和鹽水，所述鹽水池的外壁上蜿蜒附著有制冷劑管道，所述制冷制管道的兩端分別延伸到所述殼體的外部，所述位于殼體外部的管道上設置有壓縮機和散熱器；分別選取至少三種所述步驟（a）中所得到的細菌懸液均勻地分裝到至少三組安瓿瓶中，并將至少所述三組安瓿瓶分別掛到所述掛架上，將所述飽和鹽水的水溫降低并維持在-18℃，下降所述掛架至所述安瓿瓶內的細菌懸浮液的液面位于所述飽和鹽水的液面以下時止，并將所述盛放有細菌懸液的安瓿瓶浸在所述飽和鹽水中凍結3h ；

c、將所述鹽水池內飽和鹽水排空，將所述殼體內抽真空干燥，干燥壓力10Pa，干燥溫度25 ℃，分別收集干燥后益生菌粉；

d、以等重比例的重量份配比稱取至少三種益生菌粉，并混合均勻，得到混合益生菌群；

e、將混合益生菌群，加入三維混合機中，密封好混合罐，把混合速度調到20r/min，連續混合50min，制成益生菌群粉成品；

f、將所述益生菌群粉成品通過自動顆粒包裝機按預設重量分裝成袋，并置于低溫保存。

9.一種通過權利要求8所述的益生菌群的制備方法所制得的應用，其特征在于，將包括1種芽孢桿菌、2種乳酸桿菌、1種雙歧桿菌、1種放線菌和2種光合細菌的復合菌制成益生菌群粉，將制得的益生菌群粉溶于水制成益生菌群水劑；保存溫度4-6℃，保質期6個月；用于預防和治療包括濕疹或瘙癢的皮膚不適應癥。