[發(fā)明專利]一種高效防治多種作物枯萎病的生防復(fù)合菌劑LAS

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710100197.X
• 申請日: 2017-02-23
• 公開（公告）號: CN106754567B
• 公開（公告）日: 2018-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭堅華;蔣春號;米丹丹;鄭穎
• 申請（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00;A01N63/02;A01P3/00;A01P21/00;C12R1/125;C12R1/085
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司32218
• 代理人: 傅婷婷,徐冬濤

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種高效防治多種作物枯萎病的生防復(fù)合菌劑LAS，屬于農(nóng)業(yè)生物防治技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

西瓜、黃瓜、甜瓜和南瓜在全球范圍內(nèi)的農(nóng)業(yè)作物產(chǎn)量中占有舉足輕重的地位，其中枯萎病害是影響上訴4種農(nóng)業(yè)作物產(chǎn)量和品質(zhì)的主要病害之一。枯萎病是由尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.)引起一種毀滅性的土傳性病害，俗稱萎凋病、死秧病等，在世界范圍內(nèi)均有發(fā)生。隨著種植面積的擴大和連茬種植更加重了枯萎病的發(fā)生。

目前，枯萎病害防治主要的措施還是使用化學藥劑。雖然化學藥劑可以在一定程度上防治枯萎病，但是與此同時，土壤中許多有益的微生物也會受到不同程度的傷害。有些化學藥劑的使用會造成土壤污染和化學農(nóng)藥殘留等嚴重的問題。除此之外，選育抗病品種和加強田間管理措施對防治病害也有一定的作用。但是抗病品種的選育周期長，且枯萎病菌致病力變異大，抗性極易消失養(yǎng)。

農(nóng)業(yè)措施中比較有效的是輪作倒茬，尤其是水旱輪作，能夠有效的降低土壤中菌量，減少病害發(fā)生，但在實際應(yīng)用中存在一定困難。一是西瓜、黃瓜、南瓜和甜瓜屬于高經(jīng)濟值作物；二是由于枯萎菌菌能夠在土壤中存活十幾到幾十年，短期輪作達不到預(yù)期目的；三是種植大多數(shù)非寄主植物不能減少微菌核在土壤中的數(shù)量，而且非寄主的根分泌物仍能為微菌核存活提供營養(yǎng)。

在這種發(fā)展情況下，不少目光開始轉(zhuǎn)移到生物防治手段。生物防治與其他方法相比，具有安全、有效、持久的特點，特別是避免了化學防治帶來的一系列問題。生防制劑對病害防治效果好，對人畜無毒，不污染環(huán)境，無殘留；對病蟲害的殺傷特異性強，不傷害天敵，有益生物，能保持生態(tài)平衡；生產(chǎn)原料和有效成分為天然產(chǎn)物易降解，可回歸大自然，保證可持續(xù)發(fā)展；可用生物技術(shù)和基因工程的方法對微生物進行改；多種因素和成分發(fā)揮作用，病原菌難以產(chǎn)生抗藥性。據(jù)報道，枯萎病的生防真菌主要有木霉菌、粘帚霉，但上述生防菌防治效果不夠理想，主要原因是這些生防菌在寄主根際定殖能力差?？菸∩兰毦斜容^有前途的種類是芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、熒光假單胞菌、芽孢桿菌等。一般說來，多種生防菌混合使用其效果比單一生防菌要好。另外，將生防菌劑和農(nóng)業(yè)栽培措施結(jié)合起來使用，可為生防菌提供一個良好的棲境，使其能盡量發(fā)揮其本身的防治潛能。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種高效防治多種作物枯萎病的微生物組合物及由其制備的微生物復(fù)合菌劑。

本發(fā)明的另一目的是提供該微生物組合物及由其制備的微生物復(fù)合菌劑的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的可通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種高效防治多種作物枯萎病的微生物組合物，由以下3種細菌組成,分別是：芽胞桿菌JC65(Bacillus sp.)，于2010年12月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC No.4475；蠟狀芽孢桿菌CH01(Bacillus cereuse),于2015年11月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC NO.11677；枯草芽胞桿菌SM16為(Bacillus subtilis)，于2009年06月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC No.3127。

本發(fā)明所述的微生物組合物在防治枯萎病和促進作物生長方面的應(yīng)用。

優(yōu)選將所述的三種菌株JC65、CH01和SM16發(fā)酵后的濕菌與本實驗室的菌體保藏液(屬本實驗室已授權(quán)專利，專利號ZL02112559.7，公開專利號CN1358838，公開日：2002年7月17日)按1：40(g/ml)配成菌劑，可室溫保存2～3年。該復(fù)合菌劑可以稀釋后于西瓜苗移栽時澆灌施用。

本發(fā)明所述的微生物組合物在制備防治枯萎病和促進作物生長的微生物復(fù)合菌劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述的微生物組合物制備的微生物復(fù)合菌劑。

本發(fā)明所述的微生物復(fù)合菌劑,優(yōu)選通過以下方法制備得到：將所述的菌株JC65、CH01和SM16分別接種到LB平板上劃線，28℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14-16h，待長出單菌落后，挑取單菌落接入含有5mL的LB培養(yǎng)液的試管中，置于28℃，200r/min的搖床中培養(yǎng)，制成種子液；以1％的接種量將種子液接種于裝有500mL的LB培養(yǎng)液的三角瓶里，置于28℃，200r/min的搖床中培養(yǎng)48h，將3種菌液濃度稀釋到5×10⁷CFU/mL后按照1:1:1的比例混合均勻，即為所述的微生物復(fù)合菌劑。