[發明專利]一種側孢芽孢桿菌微生物肥料及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201710098364.1
• 申請日: 2017-02-23
• 公開（公告）號: CN106831015A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 麻林濤;王莉
• 申請（專利權）人: 麻林濤
• 主分類號: C05F11/08
• 分類號: C05F11/08;C12N1/20;C12R1/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種側孢芽孢桿菌微生物肥料的制備方法，所述方法包括如下步驟：

S1：側孢芽孢桿菌菌株活化，無菌水沖洗，得到種子液；

S2：使用第一培養液對種子液進行擴增培養，得到第一擴增培養液；

S3：使用第二培養液對第一擴增培養液進行培養，得到第二擴增培養液；

S4：第二擴增培養液進行液體發酵培養，得到發酵液；

S5：將發酵液淋入固體培養基中進行固體發酵，并進行后處理，得到側孢芽孢桿菌發酵菌劑；

S6：將側孢芽孢桿菌發酵菌劑與有機質混合物進行堆肥發酵處理，從而得到所述側孢芽孢桿菌微生物肥料。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述步驟S1具體如下：

S1-1：選擇側孢芽孢桿菌菌株，并在無菌條件下接種于斜面培養基上進行活化培養，得到活化菌株；

S1-2：無菌水清洗斜面，得到所述種子液；

步驟S1-1中，每100g所述斜面培養基的組成為：瓊脂5-6g、蛋白胨3-4g、酵母浸膏0.02-0.03g、黃豆粉2-3g、玉米粉0.8-1.4g、牛肉膏3-4g、氯化鈉0.2-0.5g、葡萄糖0.06-0.1g，余量為無菌水，并調節pH值為7-7.2。

3.如權利要求1-2任一項所述的制備方法，其特征在于：所述步驟S2具體如下：

S2-1：配制第一培養液

分別稱取如下的物質：金屬元素水溶液25ml、維生素E 1.5g、檸檬酸0.15g、L-脯氨酸0.2mg、蔗糖2.5g、瓊脂8g、蛋白胨12g、酵母浸膏1.4g、硫酸銨1g、磷酸鈉2.5g、牛肉膏3.5g和硝酸鈉4g；

將上述物質加入到去離子水中，充分攪拌完全，并用去離子水定容至1000ml，即得到所述第一培養液。

S2-2：按照1:40-50的體積比，將所述種子液接種于所述第一培養液中，在34-36℃下通風振蕩培養20-24小時，從而得到所述第一擴增培養液。

4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于：步驟S2-1中，所述金屬元素水溶液是將2.5g硫酸錳、3g氯化鋅、4g硫酸鎂、1.5g氯化鈷、2g硝酸銅、3g氯化鈣、4g氯化亞鐵、3g氯化鐵充分溶解于1000ml蒸餾水中而得到的。

5.如權利要求3-4任一項所述的制備方法，其特征在于：步驟S2-2中，所述通風所通入的氣體中，氧氣體積含量為14-20％，優選為16-18％，最優選為17％。

6.如權利要求1-5任一項所述的制備方法，其特征在于：所述步驟S3具體如下：

S3-1：將第一培養液中的酵母浸膏用量減半，且金屬元素水溶液的用量增大一倍，其它均不變，從而得到所述第二培養液；

S3-2：按照1:30-35的體積比，將所述第一擴增培養液接加入到所述第二培養液中，在34-36℃下通入空氣振蕩培養14-16小時，從而得到所述第二擴增培養液。

7.如權利要求1-6任一項所述的制備方法，其特征在于：所述步驟S4具體如下：

將所述第二擴增培養液加入到為其體積20-30倍的液體發酵培養基中進行兩段式升溫發酵培養，發酵培養總時間為10-12小時，期間一直通入空氣，通入空氣的通風比為1:0.6-1，從而得到所述發酵液；

其中，所述液體發酵培養基以每升(L)計，包含酵母浸膏0.5g、蛋白胨2g、麥芽糖4g、葡萄糖1g、硫酸錳0.6g、氯化鈉3.8g、黃豆粉7g、硼酸1.5g、硝酸鉀2.5g、尿素6g、賴氨酸0.7g和硫酸銨1.5g，余量為無菌水；

其中，所述兩段式升溫發酵培養是指在發酵培養總時間的前一半時間中，發酵溫度為32-34℃，然后在10分鐘內將溫度升高至38-40℃，并在該溫度下完成后續剩余時間的發酵。

8.如權利要求1-7任一項所述的制備方法，其特征在于：所述步驟S5具體如下：

按照質量比1:10-14的比例，將所述發酵液淋入固體培養基中，再加入適量去離子水，使整體的水分質量含量為32-36％，然后充分翻拌均勻，裝入長度為3米、寬度為1.5米和深度為1.5米的發酵槽中，自然堆積發酵60-70小時，期間始終保持整體的水分質量含量為32-36％，并通入無菌風保持發酵槽內部的中心溫度為56-60℃；發酵結束后，通熱風干燥，直至水分質量含量低于5％，得到發酵菌劑。