[發明專利]一種篩選p53與MDM2蛋白相互作用的抑制劑的方法

在審

• 申請號: 201710096858.6
• 申請日: 2017-02-22
• 公開（公告）號: CN106701996A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 王建秀;衣馨瑤;吳玲;范宇娟;夏永紅
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種p53與MDM2蛋白相互作用的抑制劑篩選方法。該方法可免標記、在線研究p53與MDM2蛋白的相互作用并篩選抑制劑。

背景技術

癌癥抑制轉錄因子p53被稱為“基因組衛士”，它能調控細胞增殖、DNA修復以及細胞衰老和凋亡。負向調節劑MDM2蛋白能結合p53蛋白的N端區域，阻礙p53的轉錄活性。通過篩選特定抑制劑來抑制p53與MDM2蛋白的相互作用，可恢復p53的穩定性及轉錄活性功能。因此，開發篩選二者相互作用抑制劑的方法無疑成為癌癥研究的熱點；本方法首先將一致性雙鏈DNA修飾到芯片表面，一致性雙鏈DNA隨后捕獲p53蛋白。當抑制劑與MDM2蛋白共存時，由于抑制劑與p53蛋白質競爭性地結合MDM2的憎水區域，在芯片表面被p53蛋白所捕獲的MDM2蛋白的量會大幅度降低，表面等離子體激元共振信號隨之變化，從而實現抑制劑的在線篩選。

發明內容

本技術發明了一種p53-MDM2蛋白相互作用的抑制劑篩選方法，相比于現有技術，有如下優點：該方法具有免標記、步驟簡單、靈敏度高、重現性好等優點，能夠實現抑制劑的快速、實時、連續在線篩選。在癌癥治療藥物的開發方面，具有良好的應用前景。具體實施步驟參照如下實例：在芯片表面先后流動注射巰基十一烷酸、2.0μM氨基化的DNA、靶點DNA，在線組裝形成一致性雙鏈DNA。隨后流動注射4.5nM的p53蛋白質；將抑制劑與25nM的MDM2蛋白在25℃下孵育2h后,流動注射到上述芯片表面，通過檢測表面等離子體激元共振信號的變化，來篩選抑制劑并衡量其抑制效果。