[發(fā)明專利]一種復(fù)合間充質(zhì)干細(xì)胞的功能膠原支架及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710094487.8
• 申請(qǐng)日: 2017-02-21
• 公開（公告）號(hào): CN108421087A
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 戴建武;趙燕南;陳冰;肖志峰;韓素芳;李星
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京中科再康生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): A61L27/38
• 分類號(hào): A61L27/38;A61L27/24
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;何葉喧

本發(fā)明公開了一種復(fù)合間充質(zhì)干細(xì)胞的功能膠原支架及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的膠原支架是將離體動(dòng)物筋膜依次用丙酮、脫氧膽酸鈉溶液、TritonX?100溶液、胃蛋白酶水溶液和木瓜蛋白酶溶液浸泡，凍干后得到的。本發(fā)明將間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合神經(jīng)再生膠原支架用于急性脊髓損傷以及陳舊性脊髓損傷，從多個(gè)方面綜合評(píng)定，此功功能膠原支架可以在很大程度上促進(jìn)急性以及陳舊性脊髓損傷犬運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)、神經(jīng)再生、軸突髓鞘化以及突觸形成。本研究所提供的功能生物材料對(duì)脊髓損傷修復(fù)具有重要意義，并為未來(lái)功能生物材料應(yīng)用于臨床提供理論支撐。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種復(fù)合間充質(zhì)干細(xì)胞的功能膠原支架及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)是一種嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷，可造成損傷以下的感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)障礙，反射異常以及大小便失禁等相應(yīng)的病理改變，致殘性高，是醫(yī)學(xué)界面臨的一大難題。目前臨床上的治療方法主要是手術(shù)治療和藥物治療，雖然在一定程度上緩解了病情發(fā)展，但不能有效解決神經(jīng)功能障礙問(wèn)題。

近年來(lái)，隨著對(duì)脊髓損傷病理生理過(guò)程認(rèn)識(shí)的不斷加深，細(xì)胞移植在脊髓損傷治療中顯示出良好的應(yīng)用前景。脊髓損傷后細(xì)胞移植有以下幾個(gè)目的：填充損傷空洞；替代死亡細(xì)胞(如提供新的神經(jīng)元或髓鞘化細(xì)胞)；創(chuàng)造一個(gè)更有利于軸突再生的環(huán)境。

間充質(zhì)干細(xì)胞可來(lái)源于人體發(fā)生、發(fā)育過(guò)程的許多種組織，不僅具備強(qiáng)大的自我更新和分化潛能，而且還具有獲取方法簡(jiǎn)單；體外培養(yǎng)容易；分泌多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子以及具有免疫調(diào)節(jié)作用等特點(diǎn)。胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞和臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞由于采集時(shí)對(duì)產(chǎn)婦及新生兒無(wú)任何危害及損傷；采集方便，易于保存和運(yùn)輸，倫理學(xué)爭(zhēng)議少等優(yōu)點(diǎn)，相比于其它來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞具有更大的應(yīng)用潛能。

脊髓損傷后由于脊髓神經(jīng)元大量壞死，壞死后形成的空洞和瘢痕阻礙了軸突的生長(zhǎng)。組織工程支架植入可以為軸突的生長(zhǎng)搭橋，并可作為損傷部位移植細(xì)胞的載體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種復(fù)合間充質(zhì)干細(xì)胞的功能膠原支架及其應(yīng)用。

本發(fā)明提供了一種膠原支架的制備方法，包括如下步驟：將離體動(dòng)物筋膜依次用丙酮、脫氧膽酸鈉溶液、TritonX-100溶液、胃蛋白酶溶液和木瓜蛋白酶溶液浸泡，凍干后得到所述膠原支架。

所述膠原支架的制備方法包括如下步驟(a1)-(a6)：

(a1)將離體動(dòng)物筋膜在丙酮中浸泡，得到丙酮處理后動(dòng)物筋膜；

(a2)將所述丙酮處理后動(dòng)物筋膜在脫氧膽酸鈉溶液中浸泡，得到脫氧膽酸鈉處理后動(dòng)物筋膜；所述脫氧膽酸鈉溶液中脫氧膽酸鈉的質(zhì)量百分含量為1-5％；

(a3)將所述脫氧膽酸鈉處理后動(dòng)物筋膜在TritonX-100溶液中浸泡，得到TritonX-100處理后動(dòng)物筋膜；所述TritonX-100溶液中TritonX-100的質(zhì)量百分含量為0.5-2％；

(a4)將所述TritonX-100處理后動(dòng)物筋膜在胃蛋白酶溶液中浸泡，得到胃蛋白酶處理后動(dòng)物筋膜；所述胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶的質(zhì)量百分含量為0.2-3％；

(a5)將所述胃蛋白酶處理后動(dòng)物筋膜在木瓜蛋白酶溶液中浸泡，得到木瓜蛋白酶處理后動(dòng)物筋膜；所述木瓜蛋白酶溶液中木瓜蛋白酶的質(zhì)量百分含量為0.2-2％；

(a6)將所述木瓜蛋白酶處理后動(dòng)物筋膜凍干，得到膠原支架。

步驟(a1)中，所述浸泡時(shí)間為12-36小時(shí)。所述浸泡時(shí)間具體可為24小時(shí)。所述浸泡溫度具體可為16℃。所述步驟(a1)還包括如下步驟：完成所述浸泡后，置于去離子水中浸泡清洗3次。每次置于去離子水中浸泡清洗的時(shí)間具體可為2小時(shí)。