[發明專利]一種調節肝再生的c9orf116基因及其siRNA干擾靶點和應用

在審

• 申請號: 201710094193.5
• 申請日: 2017-02-21
• 公開（公告）號: CN106754950A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 徐存拴;張春艷;孟竺;張世馥;常翠芳;張全義;史世會;呂中原;王緒洋
• 申請（專利權）人: 河南師范大學;河南新鄉華星藥廠
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/47;C07K16/18;A61K48/00;A61K45/00;A61K31/713;A61P1/16
• 代理公司: 新鄉市平原專利有限責任公司41107
• 代理人: 于兆惠

技術領域

本發明屬于分子生物學及生物醫藥技術領域，具體涉及一種調節肝再生的c9orf116基因及其siRNA干擾靶點和應用。

背景技術

肝臟是機體的重要器官，具有儲存、代謝、生物轉化、解毒、造血、合成膽色素、分泌和再生等功能。研究肝再生相關基因對肝細胞增殖和肝再生的作用，對揭示肝再生機制、構建人工肝、建立治療和預防肝病的方法等都有重要的理論意義和應用價值。目前，已有大量報道指出，應用RNAi技術特異性地向哺乳動物和人類細胞中導入siRNA來降低靶基因的表達，進而引起靶蛋白的表達下降，最終達到高效特異性的基因治療作用。

c9orf116基因全長為4351bp，含有3個外顯子和2個內含子，其中3個外顯子分別位于該基因的1-211、951-1029、3764-4351bp處，其mRNA全長為878bp，共編碼136個氨基酸。比較大鼠、小鼠和人的c9orf116基因序列發現，三者基因結構相似，CDS區長度基本一致。進一步通過Cluster X軟件比對大鼠、小鼠和人的c9orf116氨基酸序列發現，它們的氨基酸序列相似性可達到90.74%，其保守結構域是DUF4490，屬于DUF4547超家族，是個未知功能的結構域，首先在真核生物中發現具有這個結構域家族的蛋白是典型的101-220個氨基酸長度。在小鼠中，其家族成員由P53誘導表達，在DNA損傷應答中起一定作用。然而，在大鼠體內，c9orf116基因還是一個功能不詳的基因，能否促進體外培養的大鼠肝細胞增殖尚不明確。

發明內容

本發明解決的技術問題是提供了一種調節肝再生的c9orf116基因及其siRNA干擾靶點和應用，該c9orf116基因在細胞增殖與分化、腫瘤治療及抗腫瘤藥物研發等方面具有潛在的應用價值。

本發明為解決上述技術問題采用如下技術方案：

一種調節肝再生的c9orf116基因，其特征在于該c9orf116基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

進一步優選，所述的調節肝再生的c9orf116基因在制備促進肝再生用的物質中的應用。

進一步優選，所述的調節肝再生的c9orf116基因在制備促進肝再生用的物質中的應用，其特征在于：通過調節轉錄因子JUN調節CCNA2、CCND1及MYC基因的表達共同促進肝細胞增殖。

進一步優選，所述促進肝再生用的物質為c9orf116蛋白的特異性抗體。

進一步優選，所述調節肝再生的c9orf116基因的拮抗劑在制備促進肝再生用的藥物中的應用。

進一步優選，所述調節肝再生的c9orf116基因的拮抗劑是特異性干擾c9orf116基因表達的siRNA干擾靶點，該siRNA干擾靶點的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

本發明首次提出了一種調節肝再生的c9orf116基因的功能及其應用，采用分子生物學手段首次確證基因c9orf116與肝再生有顯著相關性，篩選了一條siRNA干擾靶點，為進一步的研究奠定基礎。

附圖說明

圖1為c9orf116 siRNA轉染BRL-3A細胞后c9orf116 mRNA水平表達情況圖，其中C9-NC表示陰性對照，C9-S1、C9-S2和C9-S3表示c9orf116的3個siRNA片段；

圖2為重組慢病毒在BRL-3A細胞中對c9orf116基因mRNA和蛋白水平的影響圖；

圖3為c9orf116對細胞活力的影響圖，其中A為MTT法檢測c9orf116干涉后對細胞活力的影響，B為MTT法檢測c9orf116過表達后對細胞活力的影響；

圖4為c9orf116對細胞周期的影響圖，其中A為流式細胞術檢測c9orf116干涉后對細胞周期變化，B為流式細胞術檢測c9orf116過表達后對細胞周期變化；

圖5為c9orf116對細胞增殖相關基因表達的影響，其中c9orf116-PCDH為過表達c9orf116后細胞增殖相關基因的mRNA水平的表達變化，c9orf116-SIRNA為干涉c9orf116后細胞增殖相關基因的mRNA水平的表達變化。

具體實施方式

以下通過實施例對本發明的上述內容做進一步詳細說明，但不應該將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實施例，凡基于本發明上述內容實現的技術均屬于本發明的范圍。

實施例