[發明專利]一種降低半靜態養殖水中毒死蜱誘導斑馬魚死亡率的方法

有效

• 申請號: 201710093108.3
• 申請日: 2017-02-21
• 公開（公告）號: CN106614151B
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 張蓉;張健;高倩;潘丹丹
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: A01K61/10
• 分類號: A01K61/10
• 代理公司: 安徽合肥華信知識產權代理有限公司 34112
• 代理人: 劉躍

本發明公開了一種降低半靜態養殖水中毒死蜱誘導斑馬魚死亡率的方法，本發明針對半靜態水中斑馬魚對毒死蜱的暴露，檢測、調控水中毒死蜱的濃度，通過添加EGCG試劑，調整EGCG與水中毒死蜱的濃度比，達到降低斑馬魚的死亡率。發明方法通過原位或異位技術實施，簡單易行，可提高斑馬魚暴露于毒死蜱的存活率，避免使用化學解毒劑帶來的后續副作用，提高養殖的經濟效益；同時避免排放廢水中化學解毒劑的二次污染，提高環境經濟效益。

技術領域

本發明涉及水產品養殖技術領域，尤其涉及一種降低半靜態養殖水中毒死蜱誘導斑馬魚死亡率的方法。

背景技術

高毒有機磷農藥的替代品種毒死蜱被廣泛用于農業生產和草坪殺蟲劑，已造成環境水體污染。毒死蜱對人類屬于中低毒農藥，但是魚類的敏感類農藥。毒死蜱屬于神經毒劑，其功能之一是抑制機體內神經中乙酰膽堿酯酶AChE或膽堿酯酶ChE的活性，破壞正常的神經沖動傳導，引起斑馬魚中毒死亡。另外，機體在正常情況下，體內氧自由基處于動態平衡狀態。 一旦氧自由基在機體內失去平衡，如超過了細胞抗氧化防護的能力，則會造成氧脅迫。研究表明，達到半致死濃度的毒死蜱會破壞機體氧自由基平衡，形成氧化脅迫，造成機體損傷、死亡。

對于斑馬魚，如果血清中毒死蜱濃度升高，酶活性將會降低，解毒功能下降。魚類有機磷農藥中毒，多用“阿托品”灑入養殖水中進行解毒，降低致死率。但是“阿托品”易于魚體內聚集，具有明顯的生理副作用。同時如果滯留在養殖廢水中，擴散到其他環境介質，易造成環境危害。表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）是一種來源于植物的多酚化合物，具有抗氧化、抗癌、抗突變等生理活性，這些功效歸結于他們對氧自由基的清除能力。研究表明EGCG具有與腸、肝、和肺中的其他酶共同阻止某些有害物質的活力，保護機體。最新研究證明EGCG可能具有神經保護功能。到目前為止， EGCG仍然被認為是具有環境友好性的純天然試劑。

斑馬魚是生態和環境指示性生物，在生態、環境和毒理等方面極具研究價值，同時又具有觀賞性等其他用途，其養殖通常在小體積半靜態水中進行。

發明內容

本發明提供了一種降低半靜態養殖水中毒死蜱誘導斑馬魚死亡率的方法，采用EGCG降低水中毒死蜱誘導斑馬魚死亡率 。本發明針對半靜態水中斑馬魚對毒死蜱的暴露，檢測、調控水中毒死蜱的濃度，通過添加EGCG，調整半靜態水中EGCG與毒死蜱濃度比 ，來降低斑馬魚的死亡率。發明方法簡單易行，可提高斑馬魚暴露于毒死蜱的存活率，避免使用化學解毒劑帶來的后續副作用，提高養殖的經濟效益；同時避免排放廢水中化學解毒劑的二次污染，提高環境經濟效益。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種降低半靜態養殖水中毒死蜱誘導斑馬魚死亡率的方法，其特征在于： 在含有毒死蜱的半靜態養殖水中添加適量的EGCG ，使得養殖水中EGCG與毒死蜱的濃度比=（1-2）：1，所述的毒死蜱在水中的濃度為0.48-0.70 mg/L 。

所述的一種降低半靜態養殖水中毒死蜱誘導斑馬魚死亡率的方法，其特征在于，具體操作步驟如下：

（1）取適量養殖水，測量水中毒死蜱母體起始濃度、pH值、水溫，調整養殖水的pH=6.8~8.5，控制水溫為18～25℃；

（2）根據步驟（1）測量得到的水中毒死蜱母體起始濃度，然后按比例加水稀釋至毒死蜱的濃度為0.48-0.70mg/L， 在按比例向養殖水中加入已預先配制好的高濃度EGCG水溶液，使水中EGCG與毒死蜱的濃度比=（1-2）：1， 其中，最佳配比為 EGCG：毒死蜱=（0.5-1.0）：0.5，（mg/L：mg/L），即可有效控制斑馬魚死亡，達到降低半靜態養殖水中毒死蜱誘導斑馬魚死亡率的目的。

所述高濃度EGCG溶液是指由純度≥90%的EGCG粉狀固體配制成濃度≥5.0g/L的EGCG溶液。

本發明涉及利用純植物提取劑EGCG的配比和使用方法，降低水中斑馬魚對毒死蜱的暴露死亡率。相關研究實驗如下：