[發明專利]一種基于3D溫敏型生物凝膠懸滴培養法體外計數肝癌循環腫瘤細胞的方法有效
| 申請號： | 201710093047.0 | 申請日： | 2017-02-21 |
| 公開（公告）號： | CN106929475B | 公開（公告）日： | 2020-08-21 |
| 發明（設計）人： | 丁國善;王全興;郭猛;劉芳;張銘健;展洋洋;鮑蕾蕾;郭聞淵;曹雪濤 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍第二軍醫大學 |
| 主分類號： | C12N5/09 | 分類號： | C12N5/09;C12Q1/06;G01N15/10;C08J3/075;C08L71/02;C08L5/08;C08L89/00 |
| 代理公司： | 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 趙青 |
| 地址： | 200433 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 溫敏型 生物 凝膠 培養 體外 計數 肝癌 循環 腫瘤 細胞 方法 | ||
1.一種用于懸滴培養法體外計數肝癌循環腫瘤細胞的溫敏型生物凝膠，其特征在于，由體積比為8:1:1的A液、B液和C液組成；
所述的A液，包括生物凝膠的骨架溶液和基質溶液，7mL骨架溶液與1mL基質溶液在冰上混合，并用無菌鉑金棒攪拌均勻，4℃保存，即得A液；
所述的生物凝膠的骨架溶液：使用親水鏈聚氧乙烯占60%以上的泊洛沙姆，配置體積分數為20-45%的泊洛沙姆溶液；配置體積分數為0.2-0.7%的羥丁基殼聚糖溶液；兩種液體在冰上冰浴15min后，將兩者按體積比1:1充分混合，獲得所述的生物凝膠的骨架溶液；
所述的生物凝膠的基質溶液：將0.5-0.8mgIV型膠原、0.01-0.1mg分子量為10000-50000的透明質酸和0.01-0.1mg硫酸氨基葡糖多聚糖于1mL超純水中4℃下過夜溶解，獲得所述的生物凝膠的基質溶液；
所述的B液組分為10倍濃度的DMEM/F12培養基，每1mL B液中加入1000-5000IU的rh-EGF；
所述的C液組分為pH=2.5-3.0的乳酸-乳酸鈉緩沖液0.025-0.05mol。
2.一種如權利要求1所述的溫敏型生物凝膠在制備懸滴培養法體外計數肝癌循環腫瘤細胞試劑中的應用。
3.一種用于肝癌循環腫瘤細胞懸滴培養法的試劑，其特征在于，包括權利要求1所述的溫敏型生物凝膠和懸滴培養法培養上清，所述的懸滴培養法培養上清為：DMEM/F12培養基中加入8-10%的Gibco 10099-141胎牛血清，每100mL培養基加入L-谷氨酰胺200mM。
4.一種如權利要求3所述的用于肝癌循環腫瘤細胞懸滴培養法的試劑在制備懸滴培養法體外計數肝癌循環腫瘤細胞試劑中的應用。
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