[發明專利]一種檢測ALDH2基因突變的探針及其應用和試劑盒

有效

• 申請號: 201710092259.7
• 申請日: 2017-02-21
• 公開（公告）號: CN106636441B
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發明（設計）人: 廖瑋;莫亞勤;林曉燕;張晨光
• 申請（專利權）人: 廣州易活生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 11371 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 王闖<國際申請>=<國際公布>=<進入國

本發明公開了一種檢測ALDH2基因突變的探針及其應用和試劑盒，屬于基因檢測技術領域。其包括SEQ ID NO.1所示的檢測探針，以及SEQ ID NO.2?3所示的捕獲探針中的一種或兩種。該探針可針對ALDH2基因的rs671位點的G→A突變進行檢測，其具有檢測靈敏度高、特異性強、假陽性率低等特點。

技術領域

本發明涉及基因檢測技術領域，具體而言，涉及一種檢測ALDH2基因突變的探針及其應用和試劑盒。

背景技術

乙醛脫氫酶(Acetaldehyde Dehydrogenase，ALDH)由ALDH基因編碼，可分為ALDH1A1、ALDH1B1和ALDH2。其中，ALDH2在人體內把乙醛催化成乙酸的能力最強。ALDH2基因位于第12號染色體(12q24)，由13個外顯子構成，編碼的酶蛋白肽鏈由500個氨基酸殘基組成。研究表明，該基因的多態性在亞洲人群中很常見，并且可能影響人群的飲酒行為。ALDH2與亞洲人群最為密切的是ALDH2基因的rs671位點G→A突變，可導致其編碼的多肽鏈谷氨酸(Glu)變為賴氨酸(Lys)。ALDH2基因與酒精在人體內的分解代謝有關，還參與硝酸甘油的代謝。

飲酒后吸收進入體內的乙醇，主要在肝臟進行代謝。乙醇被氧化成乙醛后，95％在肝臟變成乙酸，余下5％在其他組織及血液被代謝掉。乙醇在體內代謝產物是乙醛，是導致酒精性肝病的主要原因。由于ALDH2G(ALDH2*1)的基因序列發生突變形成ALDH2L(ALDH2*2)等位基因，二者隨機組合可編碼形成ALDH2GG、ALDH2GL或ALDH2LL，3種基因型。ALDH2*1/ALDH2*1基因型(野生型)的飲酒者，體內把乙醛氧化成乙酸能力很強，對乙醇耐受性高，可以過量飲酒，但應適當節制。ALDH2*1/ALDH2*2基因型(突變型雜合型)的飲酒者，血液中乙醛的濃度是前者的6倍，對酒有一定的耐受性，可以適量飲酒。ALDH2*2/ALDH2*2基因型(突變型純合型)的飲酒者血液中乙醛的濃度是前者的19倍，對酒敏感，沒有耐受性，飲酒后很快出現嚴重不適現象。大量乙醛滯留在體內，除了損傷肝臟導致脂肪肝、肝硬化，甚至肝癌，還與增加食道癌、口咽癌和胃癌、冠心病、心肌梗死等風險相關。

硝酸甘油作為抗心絞痛的經典藥物，已有多位學者對其生物轉化機制進行了廣泛研究，2002年Chen等發現在巰基化合物參與下，ALDH2能夠催化硝酸甘油生成1，2-二硝酸甘油和亞硝基硫醇，之后ALDH2在硝酸甘油代謝中的重要作用引起越來越多學者的關注。研究發現，ALDH2*1/ALDH2*1基因型(野生型)具有ALDH2的正常活力，ALDH2*1/ALDH2*2基因型(突變型雜合型)存在6％的酶活力，而ALDH2*2/ALDH2*2基因型(突變型純合型)則完全喪失酶的活力，使硝酸甘油無法產生一氧化氮，難以發揮藥效。

ALDH2除了與酒精性肝病等消化道疾病息息相關外，還與其他一些疾病相關，如消化道腫瘤、白血病、帕金森病(PD)等。

ALDH2位點的多態性為先天遺傳，與任何疾病的發生無關，與年齡無關。研究表明，ALDH2*2在人類各族群中的分布是不同的，亞洲人種出現頻率較高。中國漢族ALDH2*2的頻率為15.5％，墨西哥1.0％，日本人23.8％，歐洲人0％，南非人0％。中國人群中廣東漢族最高，達31％，武漢漢族12％，洛陽人15％，上海人25％，臺灣人30％。此外，ALDH2各基因型的發生率在男女性別上差異無統計學意義。

綜上所述，ALDH2基因多態性檢測將為硝酸甘油的用藥、飲酒指導及相關高風險疾病的提示提供有效的參考依據，具有重要的臨床應用意義。目前，用于ALDH2基因分型的方法有以下幾種，各有其特點。

1.限制性片段長度多態性聚合酶鏈反應技術(PCR-RFLP)