[發明專利]對嗜肺軍團菌O12型的wzm

有效

• 申請號: 201710091774.3
• 申請日: 2017-02-21
• 公開（公告）號: CN106929573B
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發明（設計）人: 王磊;任薇;楊雙;席道義;曹博陽;馮露
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12N15/11
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

本發明涉及一種對嗜肺軍團菌血清型O12型的wzm與wecA基因特異的核苷酸及其應用，所述核苷酸為：SEQ ID NO:1所示的核苷酸和/或SEQ ID NO:2所示的核苷酸；SEQ ID NO:3所示的核苷酸和/或SEQ ID NO:4所示的核苷酸；與上述的核苷酸互補的核苷酸。這些核苷酸可用于制備檢測嗜肺軍團菌血清型O12型的PCR試劑盒、基因芯片或微陣列。本發明對嗜肺軍團菌血清型O12型的wecA與wzm基因特異的核苷酸及包含該核苷酸的PCR試劑盒、基因芯片或微陣列的實用性強，PCR試劑盒配制方法簡便，檢測周期短、速度快，可操作性強，易于商品化生產，而檢測成本卻相對較低；準確性高；靈敏度高。

技術領域

本發明涉及一種核苷酸序列及其應用，特別是一種對嗜肺軍團菌血清型O12型(Legionella pneumophila serogroup 12)的wzm基因(LPS O-抗原的ABC轉運子，ABCtransporter of LPS O-antigen，以下簡稱wzm基因)和wecA基因（UDP-GleNAe:Und-PGleNAe-l- P轉移酶，參與O抗原的生物合成）特異的核苷酸序列及其應用，通過這些特異的核苷酸序列可以準確的將嗜肺軍團菌O12型與嗜肺軍團菌的其他血清型相鑒別。

背景技術

軍團菌得名于1976七月爆發的“神秘疾病”，這場疾病感染了221人，造成34人死亡。第一次爆發被發現于參加了在費城舉辦的美國200周年慶祝活動的美國退伍軍人協會會議的人群中。六個月后，病原體被確定為一個以前未知的細菌，隨后因為這個明顯的理由被命名為軍團菌。軍團菌是一種無芽胞革蘭氏陰性桿菌，對自然環境因素抵抗力較強，主要是引起呼吸道傳染疾病，可通過氣溶膠的方式在空氣中散布，人類會因為吸入含菌的氣溶膠而感染，引起軍團病（Legionnaires disease，LD）在嗜肺軍團菌被鑒定后的不長的一段時間中，超過50種軍團菌已被隔離出，其中至少有24種是與人類疾病相關的。常見的有嗜肺軍團菌（Legionella pneumophila，LP）、 米氏軍團菌（Legionella micdadei）、 博氏軍團菌（Legionella bozemanii）、 菲氏軍團菌（Legionella feeleii）、 杜莫夫軍團菌（Legionella dumoffii）和 長灘軍團菌（Legionella longbeachae）等。免疫功能低下的人可能通過任何種類的軍團菌被感染。

在這些被發現的軍團菌中，嗜肺軍團菌與人類疾病關系最為密切。根據O抗原的不同，嗜肺軍團菌可分為15個血清型。大多數（約90%）的軍團病病例，是由嗜肺軍團菌引起的。嗜肺軍團菌的O1血清型是引起世界范圍內超過84%的軍團病病例的元兇。

嗜肺軍團菌為需氧革蘭陰性桿菌，兼性胞內寄生菌，無莢膜 ，不產酸，不產氣， 有一根至數根側鞭毛或端鞭毛，可運動，菌體長 2-50μm，寬0.5-1μm。該菌生長營養要求較高，生長時需要半胱氨酸，甲硫氨酸和鐵離子等，在活性炭 - 酵母浸出液瓊脂（ BCYE） 培養基上可生長，在GVPC 平板上呈灰白色，邊緣有紫藍色光澤，挑起有拉絲；在含 2.5 % - 5.0 %的 CO₂環境中生長很好, 厭氧條件下不生長。最適溫度為 35 ℃ - 36℃， 具有一定的耐酸性和耐熱性菌落顏色一般呈灰白色、紫色、藍色或綠色, 但在普通血平板、普通瓊脂或巧克力瓊脂上不生長。嗜肺軍團菌在普通自來水中可存活400天以上，在60℃ 左右甚至在火山口附近的水塘里都能發現軍團菌的蹤跡。我國報告的病例多是嗜肺軍團菌血清 O1 型、O5型、O6型。在歐美各國嗜肺軍團菌肺炎占肺炎病例中的2.4 %-8.4 %。