[發明專利]基于DNA產生電信號及其自組裝放大信號的電化學適配體傳感器測定HER2的方法

有效

• 申請號: 201710091611.5
• 申請日: 2017-02-20
• 公開（公告）號: CN107064258B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發明（設計）人: 陽明輝;申聰聰
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/26
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 張偉;魏娟

1.基于DNA產生電信號及其自組裝放大信號的電化學適配體傳感器測定HER2的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)將金電極表面活化處理后，修飾HER2特異性多肽，再采用巰基己醇封閉；

2)在所述金電極表面滴加HER2標準溶液，使HER2與其特異性多肽結合，再將HER2適配體修飾在電極上，形成夾心結構；再利用HER2適配體包含的小段DNA觸發兩條互補的單鏈DNA在所述金電極表面進行自組裝形成雙鏈DNA；再在所述金電極表面滴加Na₂MoO₄溶液進行反應，烘干，對金電極通過方波伏安法進行測試，得到峰電流值；

3)取一系列不同濃度的HER2標準溶液，按步驟2)進行操作，得到與各濃度的HER2標準溶液相對應的峰電流值，建立HER2濃度與峰電流值的標準曲線；

4)將HER2待測溶液替換步驟2)中的HER2標準溶液，按步驟2)進行操作，得到峰電流值，再根據標準曲線計算HER2待測溶液濃度；所述HER2適配體堿基序列為：GCAGCGGTGTGGGGTATCGTTAATTCGGTCG；所述兩條互補單鏈DNA的堿基序列分別為：ATAGCAATTAAGCCAGCCAGGTTCGGTGCAT和GCTGGCT TAATTGCTATATGCACCGAACCTG。

2.根據權利要求1所述的基于DNA產生電信號及其自組裝放大信號的電化學適配體傳感器測定HER2的方法，其特征在于：金電極表面活化處理的過程為：將金電極依次采用氫氧化鈉溶液和Piranha溶液活化處理。

3.根據權利要求2所述的基于DNA產生電信號及其自組裝放大信號的電化學適配體傳感器測定HER2的方法，其特征在于：金電極采用氫氧化鈉溶液活化處理過程為：將金電極置于0.08～0.12M的NaOH溶液中，通過循環伏安法，在-1.5～0.6V的電壓區間內掃循環伏安曲線20～40圈，掃描速率為0.5～1.5V/s，得到平滑穩定的掃描曲線；

金電極采用Piranha溶液活化處理過程為：將金電極置于Piranha溶液中，浸泡5～10分鐘。

4.根據權利要求1所述的基于DNA產生電信號及其自組裝放大信號的電化學適配體傳感器測定HER2的方法，其特征在于：在4～25℃溫度下，將金電極在HER2特異性多肽溶液中浸泡8～12h，用水清洗金電極后，再將金電極置于巰基己醇溶液中浸泡1～1.5小時。

5.根據權利要求1所述的基于DNA產生電信號及其自組裝放大信號的電化學適配體傳感器測定HER2的方法，其特征在于：將HER2標準溶液滴加到金電極表面，在4～25℃條件下反應1～2個小時；再將HER2適配體溶液滴加到金電極表面，在4～25℃條件下反應1～2個小時；再將含兩條互補單鏈DNA的溶液滴加到金電極表面，在35～39℃條件下反應3～4個小時；再將Na₂MoO₄溶液滴加到金電極表面，反應10～20分鐘。

6.根據權利要求1所述的基于DNA產生電信號及其自組裝放大信號的電化學適配體傳感器測定HER2的方法，其特征在于：方波伏安法是在H₂SO₄溶液中，在0.1～0.45V的電勢范圍內進行方波伏安曲線的測定。

7.根據權利要求1所述的基于DNA產生電信號及其自組裝放大信號的電化學適配體傳感器測定HER2的方法，其特征在于：一系列不同濃度的HER2標準溶液為濃度分別為0pg/mL、1pg/mL、5pg/mL、10pg/mL、25pg/mL、50pg/mL、100pg/mL和200pg/mLHER2標準溶液。